妊娠期哮喘誘導子代腎上腺髓質細胞向交感神經元轉變機制.pdf

1、背景:腎上腺髓質嗜鉻細胞（AMCC）分泌腎上腺素在支氣管哮喘調節(jié)支氣管收縮與舒張功能中發(fā)揮作用。表觀遺傳學研究提示，胎兒時期母體宮內環(huán)境的異常可以印跡成年疾病的發(fā)生，AMCC在發(fā)育分化中受到母體宮內各個環(huán)節(jié)影響，其分化的最終結果可能導致腎上腺素分泌和/合成障礙，加重支氣管哮喘的發(fā)病。
　　 目的:探討妊娠期哮喘對子代腎上腺髓質細胞向交感神經元轉變的的機制及對子代支氣管哮喘發(fā)病的影響。
　　 方法:32只妊娠大鼠分為正常對

2、照組(CP)、哮喘組(AP)、NGF組(NP)和anti-NGF組(ANP)建立妊娠哮喘大鼠模型，產下子代，CP、AP、NP和ANP各組子代分別為OCP、OAP、ONP、OANP，觀察各組大鼠及其所產子代在生后3天(P3)、出生后7天(P7)、出生后14天(P14)、出生后30天(P30)、出生后60天(P60)及成年期再給予OVA致敏及激發(fā)后血清腎上腺素(EPI)、神經生長因子(NGF)、皮質酮水平，腎上腺髓質的結構的改變，腎上腺髓質

3、中NGF、苯乙醇胺N甲基轉移酶(PNMT)、Rho-GDP解離抑制因子α(Rho GDIα)和外周蛋白表達的變化。
　　 結果:
　　 1、各組母代大鼠的腎上腺髓質變化
　　 AP組血清EPI水平無明顯升高，電鏡下AMCC線粒體腫脹、脂質增多、嗜鉻顆粒濃度降低、細胞出現突起樣改變;NP組血清EPI水平較CP組降低，腎上腺髓質病變較AP組進一步加重，ANP組中上述病變有所改善。
　　 2、各組子代發(fā)育期腎上

4、腺髓質的變化
　　 OAP組及ONP組大鼠從P3到P14，AMCC腫脹、脫失、空泡化，EPI分泌顆粒出現數量減少，可見突起形成，細胞核梭形樣變。從P30到P60，AMCC空泡樣變性減少，EPI分泌顆粒逐漸增多。
　　 從P3至P14，OAP組大鼠血清EPI水平較對照組減少(P＜0.05)，從P30至P60血清EPI與OCP組大鼠比較無明顯差異，而ONP組組大鼠從P3直至P60，血清EPI水平均較對照組降低(P＜0.05)

5、。從P3至P7，OAP及ONP組大鼠血清NGF水平較對照組增加(P＜0.05)，從P14至P60，兩組血清NGF水平與OCP組比較無明顯差異。在各組子代成長過程中，P3至P60，OAP及ONP組大鼠血清皮質酮水平較OCP組明顯增加(P＜0.05)。P3至P14，OAP組大鼠PNMT在腎上腺髓質的表達較OCP組是減少的(P＜0.05)，而ONP組大鼠從P3至P60，PNMT的表達均較OCP組降低(P＜0.05)。從P3至P14，OAP及O

6、NP組大鼠腎上腺髓質嗜鉻細胞中NGF表達較對照組是增加的(P＜0.05)。
　　 3、OVA致敏及攻擊后子代腎上腺髓質變化
　　 各組子代大鼠成年后給予OVA致敏及攻擊，ONP組大鼠氣道高反應性及氣道炎癥明顯增加，OAP組大鼠AMCC出現明顯的空泡樣變性，電鏡顯示線粒體水腫，脂質增多，EPI分泌顆粒減少。ONP組大鼠AMCC神經元表型的改變較OAP組更為明顯，EPI分泌顆粒減少明顯，甚至消失，EPI分泌及釋放減少，OAP

7、與ONP組大鼠血清中EPI降低，ONP組尤為明顯，ONP組大鼠腎上腺髓質中PNMT表達明顯減少，NGF表達明顯增多(P＜0.05)。ONP組大鼠血清皮質酮水平較OCP組明顯增加(P＜0.05)。
　　 4、各組子代發(fā)育期及OVA致敏及攻擊后外周蛋白與Rho GDIα表達
　　 OCP組子代在P3時可以觀察到較弱的外周蛋白表達，P7時表達逐漸增強，P14時達其峰值，然后減少，從P30到P60保持較低的水平。OAP及ONP組

8、大鼠從P3至P14較OCP組有較強的外周蛋白表達(P＜0.05)，從P30到P60，OAP組大鼠的外周蛋白表達OCP組大鼠比較無明顯差異，而ONP組大鼠明顯減少(P＜0.05)。成年后，各組子代大鼠給予OVA致敏及攻擊，OAP組、ONP組腎上腺髓質中外周蛋白表達水平增強，且ONP組的外周蛋白表達水平高于OAP組(P＜0.05)，OANP組外周蛋白水平表達較OCP組降低(P＜0.05)。正常組的子代大鼠腎上腺髓質中Rho GDIα從P3到

9、P14表達較弱，從P30到P60表達P14表達開始增加。OAP組大鼠出生后，從P3至P14表達較OCP組弱，從P30到P60，Rho GDIα表達與OCP組無明顯差異，但ONP組Rho GDIα表達從P3至P60均較OCP組減少。從P3到P14，OANP組Rho GDIα表達與OAP組比較明顯增強(P＜0.05)，但從P30到P60，與OAP組比較無明顯差異。成年后，各組子代大鼠給予OVA致敏及攻擊，OAP組Rho GDIα表達水平減少

10、，ONP組的表達低于OAP組(P＜0.05)。OANP組的Rho GDIα表達水平較OAP組增加。
　　 結論:我們從腎上腺髓質發(fā)育學角度發(fā)現哮喘妊娠宮內高濃度的NGF暴露時，可以啟動子代大鼠腎上腺髓質細胞的功能冗余性使其表型和功能發(fā)生轉化，當其成年后受到OVA攻擊促使AMCC腎上腺嗜鉻細胞向交感神經元分化，延緩或/和抑制了腎上腺髓質結構和功能的成熟，導致腎上腺素合成受阻，支氣管收縮與舒張功能失衡，加重支氣管哮喘發(fā)病。Rho G