體外誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向多巴胺能神經(jīng)元分化.pdf

1、授予單位代碼學(xué)號或申請?zhí)柮芗夃嵵荽髮W(xué)碩士學(xué)位論文1045903341155論文題目：體外誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向多巴胺能神經(jīng)元分化作者姓名：柴立輝學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)專業(yè)名稱：醫(yī)學(xué)免疫學(xué)導(dǎo)師姓名、職稱：曹孟德副教授陳宗德副教授2006年05月16日鄭州大學(xué)2006年顧十研究生畢業(yè)論文體外誘導(dǎo)人骨髓問充質(zhì)千自J胞向多巴胺能神經(jīng)兀分化性疾病具有重要的臨床意義。目前的研究尚沒有定向誘導(dǎo)人BMScs分化為功能性DA能神經(jīng)元的直接證據(jù)。本研究根據(jù)體外已

2、經(jīng)成功誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞分化為DA能神經(jīng)元的方法，通過在體外聯(lián)合應(yīng)用細(xì)胞營養(yǎng)因子和化學(xué)誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)人BMscs向DA能神經(jīng)元進(jìn)行分化，觀察分化后的細(xì)胞是否具有神經(jīng)元電鏡下的超微結(jié)構(gòu)，檢測其是否表達(dá)DA能神經(jīng)元分化過程中的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子Nurrl、Ptx3和L_mxlb，以及是否具有分泌DA神經(jīng)遞質(zhì)的功能，探討體外誘導(dǎo)人BMsCs分化為DA能神經(jīng)元的方法和機(jī)制。方法：通過密度梯度離心法獲取正常成人骨髓中的單個(gè)核細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)法純化BM

3、sCs，流式細(xì)胞儀(nowcytometer，F(xiàn)cM)檢測cD34、cD45、cDl4、CD33、CD44、CD49、CD90w、CDll7等細(xì)胞表面標(biāo)志物在BMSCs上的表達(dá)。預(yù)先使用含20n咖LbFGF和20n咖LEGF的DMEML培養(yǎng)基培養(yǎng)擴(kuò)增BMscs3d后，更換含有50肛M腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brainderivedneurotrophyfactor，BDNF)，10∥Mforskolin(FsK)和10肛M多巴胺(dopam

4、ien，DA)的DMEML誘導(dǎo)培養(yǎng)基繼續(xù)對BMsCs進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)2w。觀察誘導(dǎo)分化2w后的細(xì)胞在透射電子顯微鏡下神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)；RT_PCR檢測DA能神經(jīng)元分化過程中的轉(zhuǎn)錄因子NuⅡ1、Ptx3、Lmxlb和神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuronespccificenolase，NSE)及酪氨酸羥化酶(tyrosinehydroxylasc，TH)基因的表達(dá)：免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測NSE和TH蛋自在分化后不同階段細(xì)胞上的表達(dá)；高效液相色