體外誘導(dǎo)獼猴骨髓基質(zhì)干細(xì)胞向許旺細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、【目的】周圍神經(jīng)缺損的修復(fù)仍是骨、顯微外科臨床難題之一.組織工程化周圍神經(jīng)(Tissue Engineered Peripheral Nerve,TEPN)的研制,為周圍神經(jīng)缺損的修復(fù)帶來了希望,但具有既定生物學(xué)功能和活性的組織工程化神經(jīng)種子細(xì)胞來源缺乏是制約組織工程化神經(jīng)研制的瓶頸問題之一.其中種子細(xì)胞如何保持符合臨床修復(fù)要求的生命力、規(guī)?；囵B(yǎng)和大量擴(kuò)增以及干細(xì)胞的定向誘導(dǎo)分化都是組織工程化神經(jīng)種子細(xì)胞研究的主要領(lǐng)域.目前用于構(gòu)建T

2、EPN的種子細(xì)胞多為自體許旺細(xì)胞(Schwann cells SCs),其雖在周圍神經(jīng)再生中有重要作用,但其為終末期細(xì)胞,存在增殖能力差,體外分離、培養(yǎng)困難和活性隨代數(shù)增加而下降,需二次手術(shù)等缺點(diǎn),不能完全滿足種子細(xì)胞的要求.近年來,由于干細(xì)胞技術(shù)的突破,有可能在體外培養(yǎng)某些干細(xì)胞,定向誘導(dǎo)分化為我們所需的組織工程化神經(jīng)的種子細(xì)胞,因此國內(nèi)、外一些學(xué)者在充分研究SC的發(fā)生、發(fā)育過程的基礎(chǔ)上致力于干細(xì)胞源性種子細(xì)胞的研究.骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(

3、Bone marrow stromal cells BMSCs)來源豐富并較易獲取,體外培養(yǎng)具有較強(qiáng)自我復(fù)制能力和多向分化潛能,自體移植克服了倫理和免疫排斥問題.國內(nèi)外有研究顯示大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞,可在體外、體內(nèi)誘導(dǎo)分化為SC樣細(xì)胞,并具有其一定的功能,揭示BMSCs可能為TEPN種子細(xì)胞的新來源.該研究為該研究室組織工程化周圍神經(jīng)研究的一部分,注重于種子細(xì)胞的研究.通過對(duì)獼猴骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的體外分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增的方法、生物學(xué)特性、表面

4、標(biāo)志、遺傳學(xué)性能,和體外誘導(dǎo)獼猴骨髓基質(zhì)干細(xì)胞向許旺細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn)方法的研究,為骨髓基質(zhì)干細(xì)胞用作組織工程化神經(jīng)種子細(xì)胞提供研究基礎(chǔ).【結(jié)論】(1)用該實(shí)驗(yàn)方法能較容易地獲得大量的獼猴BMSCs,具有與人的BMSCs相似的形態(tài)和表面標(biāo)志,第3~6代的細(xì)胞可滿足以獼猴為動(dòng)物模型的組織工程化神經(jīng)種子細(xì)胞的研究要求.(2)獼猴BMSCs體外培養(yǎng)、擴(kuò)增受多種因素的影響,37℃,5％CO2,5~10%氧濃度,濕度95%,中性的L-DMEM+10%F