骨髓基質(zhì)干細胞體外培養(yǎng)及向造血系統(tǒng)細胞轉(zhuǎn)化的實驗研究.pdf

1、目的：采用均勻設(shè)計法篩選及驗證誘導SD大鼠骨髓基質(zhì)干細胞體外轉(zhuǎn)化為造血系統(tǒng)細胞的可能性。 方法：細胞培養(yǎng)在無菌條件下分離大鼠雙側(cè)股骨骨髓腔內(nèi)骨髓，離心后棄上清培養(yǎng)24小時后換液。之后每3天換液。鑒定骨髓基質(zhì)干細胞（bone mesenchymal stem cells）用表面抗原CD34，CD44結(jié)合細胞成纖維樣生長進行鑒定。實驗取用第三代細胞分成8組：1對照組；2條件培養(yǎng)基組；3條件培養(yǎng)基+SCF+TPO；4條件

2、培養(yǎng)基+SCF；5條件培養(yǎng)基+TPO；6培養(yǎng)基+SCF+TPO；7培養(yǎng)基+SCF；8培養(yǎng)基+TPO；在倒置相差顯微鏡下觀察各組細胞。 結(jié)果：第四天觀察到第四組誘導條件下貼壁的骨髓基質(zhì)干細胞重新成為懸浮樣集落生長細胞，其余各組未見明顯形態(tài)學改變。以第四組誘導條件為模板擴大生產(chǎn)出懸浮聚集狀生長細胞，采用異硫氰酸熒光素標記的膜聯(lián)蛋白（FITC-Annexin-v）、碘化丙錠（PI）雙染色免疫熒光法[2]檢測細胞凋亡率，并與正常貼壁骨髓

3、基質(zhì)干細胞做統(tǒng)計學分析比較，比較結(jié)果未見顯著性差異。證明細胞形態(tài)學改變不是因為誘導條件引起的細胞凋亡。對懸浮狀細胞進行細胞表面抗原的免疫組織化學和免疫熒光的檢測均為CD44陽性，CD34陰性。 結(jié)論：在2-ME及干細胞因子（SCF）的作用下，骨髓基質(zhì)干細胞發(fā)生由貼壁成纖維樣生長變?yōu)閼腋〖錁娱L的形態(tài)學改變；細胞凋亡測定結(jié)果證實上述細胞的形態(tài)學改變系非細胞死亡或凋亡，提示為細胞分化的一種正常的形態(tài)學變化：對轉(zhuǎn)化后的細胞進行細胞表面