血管緊張素-(1-7)對(duì)Toll樣受體4介導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激的作用及機(jī)制.pdf

1、目的：觀察Toll樣受體4（TLR4）在氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）損傷中的作用，并探討血管緊張素（Ang）-（1-7）對(duì)上述反應(yīng)的作用及其可能的作用機(jī)制。
　　方法：對(duì)HUVEC s進(jìn)行體外培養(yǎng)，將細(xì)胞分為6組進(jìn)行干預(yù)，分別為對(duì)照組（不干預(yù)）、ox-LDL組（以ox-LDL75mg/L干預(yù)）、ox-LDL+Ang-(1-7)組[Ang-(1-7)1μmol/L預(yù)處理30min后，以ox-

2、LDL75mg/L干預(yù)]、ox-LDL+Ang-(1-7)+A-779組[A-779（Mas受體阻斷劑）1μmol/L預(yù)處理30 min，然后以Ang-(1-7)1μmol/L預(yù)處理30min，再以ox-LDL75mg/L干預(yù)]、ox-LDL+A-779組（A-7791μmol/L預(yù)處理30min后，以ox-LDL75mg/L干預(yù)）、ox-LDL+HTA125組[HTA125（TLR4特異性阻斷抗體）10μg/L預(yù)處理30 min后，以

3、o x-LDL75 mg/L干預(yù)]，給予上述干預(yù)條件共培養(yǎng)24 h后，分別以膜聯(lián)蛋白Ⅴ(Annexin-Ⅴ)-FITC/碘化丙啶（PI）雙標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)和TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，DCFH-DA標(biāo)記法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧自由基（ROS）水平，實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）檢測(cè)TLR4和N ADP H氧化酶4（NOX4）的mRNA表達(dá)水平，Western Blot檢測(cè)TLR4和NOX4的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：⑴An

4、nexinⅤ-FITC/PI雙標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)顯示，ox-LDL組的細(xì)胞凋亡比例高于對(duì)照組[（21.18±1.40）％比（1.59±0.26）%，P<0.01]，ox-LDL+Ang-(1-7)組[（7.42±1.07）%]和ox-LDL+HTA125組[（9.19±1.01）%]與ox-LDL組相比，細(xì)胞凋亡比例均降低（P均<0.01），ox-LDL+Ang-(1-7)+A-779組[（19.91±1.30）%]和ox-LDL+A-77

5、9組[（20.47±0.95）%]的細(xì)胞凋亡比例均高于ox-LDL+Ang-(1-7)組（P均<0.01）。⑵TUNEL法顯示， ox-LDL組的細(xì)胞凋亡比例高于對(duì)照組[（10.83±0.77）%比（2.83±0.82）%，P<0.01]，ox-LDL+Ang-(1-7)組[（3.66±0.54）%]和ox-LDL+HTA125組[（4.97±0.60）%]與ox-LDL組相比，細(xì)胞凋亡比例均降低（P均<0.01），ox-LDL+Ang

6、-(1-7)+A-779組[（10.69±0.62）%]和ox-LDL+A-779組[（11.43±0.42）%]的細(xì)胞凋亡比例均高于ox-LDL+Ang-(1-7)組（P均<0.01）。⑶ox-LDL組的ROS水平高于對(duì)照組（0.093±0.014比0.053±0.011，P<0.01）， ox-LDL+Ang-(1-7)組（0.063±0.011）和ox-LDL+HTA125組（0.070±0.010）的ROS水平均低于ox-LDL

7、組（P<0.01,P<0.05），ox-LDL+Ang-(1-7)+A-779組（0.088±0.003）和ox-LDL+A-779組（0.095±0.005）的ROS水平均高于ox-LDL+Ang-(1-7)組（P均<0.01）。⑷ox-LDL組 NOX4的 mRN A表達(dá)水平高于對(duì)照組（11.74±0.65比1.00±0.00，P<0.01），ox-LDL+Ang-(1-7)組（2.85±0.75）和 ox-LDL+HTA125組（

8、5.57±0.52）NOX4的 mRNA表達(dá)水平均低于 ox-LDL組(P均<0.01）， ox-LDL+Ang-(1-7)+A-779組（10.51±0.54）和ox-LDL+A-779組（11.04±1.01）NOX4的mRNA表達(dá)水平均高于ox-LDL+Ang-(1-7)組（P均<0.01）。ox-LDL組TLR4的mRNA表達(dá)水平高于對(duì)照組（27.60±1.86比1.00±0.00，P<0.01），ox-LDL+Ang-(1-7

9、)組（8.00±1.03）和ox-LDL+HTA125組（14.83±0.97）TLR4的 mRNA表達(dá)水平均低于 ox-LDL組（P均<0.01），ox-LDL+Ang-(1-7)+A-779組（24.81±2.19）和ox-LDL+A-779組（26.64±0.65）TLR4的mRNA表達(dá)水平均高于ox-LDL+Ang-(1-7)組（P均<0.01）。⑸ox-LDL組 NOX4的蛋白表達(dá)水平高于對(duì)照組（0.61±0.09比0.23±

10、0.02，P<0.01），ox-LDL+Ang-(1-7)組（0.27±0.03）和ox-LDL+HTA125組（0.22±0.02） NOX4的蛋白表達(dá)水平均低于 ox-LDL組(P均<0.01）， ox-LDL+Ang-(1-7)+A-779組（0.58±0.06）和ox-LDL+A-779組（0.61±0.03）NOX4的蛋白表達(dá)水平均高于ox-LDL+Ang-(1-7)組（P均<0.01）。ox-LDL組 TLR4的蛋白表達(dá)水平

11、高于對(duì)照組（0.18±0.02比0.08±0.01，P<0.01），ox-LDL+Ang-(1-7)組（0.07±0.01）和 ox-LDL+HTA125組（0.09±0.01）TLR4的蛋白表達(dá)水平均低于ox-LDL組（P均<0.01），ox-LDL+Ang-(1-7)+A-779組（0.18±0.02）和ox-LDL+A-779組（0.20±0.02）TLR4的蛋白表達(dá)水平均高于ox-LDL+Ang-(1-7)組（P均<0.01）。