延邊奶山羊耳成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)染人血清白蛋白基因轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化.pdf

1、本研究利用含有HSA和Neo基因的乳腺特異性表達(dá)載體pBC1-HSA轉(zhuǎn)染延邊奶山羊耳成纖維細(xì)胞，經(jīng)G418篩選后獲得轉(zhuǎn)基因細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)、傳代后進(jìn)行PCR鑒定，檢驗(yàn)?zāi)康幕蚴欠癯晒φ?。由于不同?xì)胞的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的最佳條件不同，為獲得最高的轉(zhuǎn)染效率，本試驗(yàn)通過(guò)質(zhì)粒DNA的量、脂質(zhì)體的量和細(xì)胞暴露DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物的時(shí)間三個(gè)方面來(lái)優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件。最后，通過(guò)細(xì)胞轉(zhuǎn)基因前后的生長(zhǎng)曲線和核型，比較分析轉(zhuǎn)基因?qū)Τ衫w維細(xì)胞的影響。得到試驗(yàn)結(jié)果如下：<

2、br>　　1、通過(guò)組織塊貼壁培養(yǎng)法，成功獲得延邊奶山羊耳部成纖維細(xì)胞。觀察細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)速度，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行生長(zhǎng)曲線和核型分析，可知4-13代細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，可用于轉(zhuǎn)基因試驗(yàn)。
　　2、延邊奶山羊耳成纖維細(xì)胞對(duì)G418的最小致死濃度為600μg/ml，篩選時(shí)使用濃度為700μg/ml，維持篩選濃度為350μg/ml。
　　3、適宜代數(shù)的延邊奶山羊耳成纖維細(xì)胞，利用 LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染 pBC1-HSA，