

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、基因敲除技術(shù)是利用同源重組,對(duì)基因組進(jìn)行定點(diǎn)精確遺傳修飾的一種方法。利用動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)和動(dòng)物克隆技術(shù),再結(jié)合基因打靶技術(shù),人們開(kāi)展了基因的定點(diǎn)修復(fù)、遺傳缺陷的治療、動(dòng)物不利基因的敲除失活等一系列的動(dòng)物基因組修飾的理論和應(yīng)用研究。這些技術(shù)也為動(dòng)物乳腺反應(yīng)器研究和提高表達(dá)率提供了重要幫助,為實(shí)現(xiàn)基因定點(diǎn)整合及乳腺特異性表達(dá)尋找到途徑,無(wú)疑成為當(dāng)今動(dòng)物遺傳學(xué)研究的熱門和重點(diǎn)。
β-乳球蛋白(β-lactoglobulin。BLG
2、)是嬰兒乳過(guò)敏癥的主要的過(guò)敏原之一。為了提高乳品質(zhì)量,消除乳汁中BLG過(guò)敏原顯得尤為重要。雖然當(dāng)前有針對(duì)降低BLG過(guò)敏癥的一些方法,但不能從根本上消除乳汁中的BLG,也就無(wú)法徹底地解決BLG的致敏性問(wèn)題。本研究對(duì)山羊體細(xì)胞β-lactoglobulin基因敲除進(jìn)行了初步探索,研究的目的在于利用山羊BLG基因打靶載體,對(duì)山羊耳組織成纖維細(xì)胞進(jìn)行定點(diǎn)基因敲除,然后經(jīng)過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染和藥物正負(fù)篩選技術(shù),構(gòu)建敲除BLG基因的山羊耳組織成纖維細(xì)胞,為
3、生產(chǎn)乳汁中不含BLG的山羊新品種奠定基礎(chǔ)。
本研究共分兩部分,第一,利用組織塊培養(yǎng)法分離培養(yǎng)山羊耳組織成纖維細(xì)胞;第二,利用構(gòu)建的打靶載體,構(gòu)建敲除β-lactoglobulin基因的成纖維細(xì)胞。主要進(jìn)行了:(1)利用組織塊培養(yǎng)法分離培養(yǎng)山羊耳組織成纖維細(xì)胞,并進(jìn)行了細(xì)胞凍存復(fù)蘇,測(cè)定了細(xì)胞活率和生長(zhǎng)曲線:(2)利用脂質(zhì)體法將打靶載體pBLG2T載體轉(zhuǎn)染入山羊耳組織成纖維細(xì)胞;(3)用G418和丙氧鳥苷對(duì)轉(zhuǎn)染后的成纖維細(xì)胞
4、進(jìn)行了共計(jì)17d的正負(fù)藥物篩選;(4)PCR鑒定篩選得到的細(xì)胞克隆;(5)比較陽(yáng)性細(xì)胞和普通細(xì)胞的活力區(qū)別,并對(duì)陽(yáng)性細(xì)胞克隆進(jìn)行核型分析。研究結(jié)果如下:
1.成功分離培養(yǎng)了山羊耳組織成纖維細(xì)胞。凍存前細(xì)胞存活率為97.0%,經(jīng)凍存復(fù)蘇后的細(xì)胞存活率為92.3%。細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線里“S”型,依次經(jīng)歷了潛伏生長(zhǎng)期、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
2.根據(jù)山羊耳組織成纖維細(xì)胞對(duì)G418的耐受分析結(jié)果和細(xì)胞生長(zhǎng)狀況,選擇G418
5、濃度400μg/mL為初篩濃度,200μg/mL為維持濃度,對(duì)細(xì)胞進(jìn)行了7d的正篩選,然后用G418和GANC進(jìn)行了10d的負(fù)篩選,得到了12個(gè)細(xì)胞克隆。
3.PCR法檢測(cè),結(jié)果顯示只有1號(hào)細(xì)胞克隆有neo基因條帶,并出現(xiàn)了預(yù)期的打靶條帶,初步認(rèn)為該克隆發(fā)生了預(yù)期的同源重組。該陽(yáng)性細(xì)胞克隆細(xì)胞核型穩(wěn)定,可以作為供體細(xì)胞。細(xì)胞活力顯著低于普通成纖維細(xì)胞的細(xì)胞活力(1.556±0.026vs1.726±0.036.P<0.01
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- Edar基因敲除絨山羊胎兒成纖維細(xì)胞系的構(gòu)建.pdf
- 延邊奶山羊耳成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系的建立.pdf
- 新生豬肌組織成纖維細(xì)胞系和耳部皮膚成纖維細(xì)胞系的建立.pdf
- 延邊奶山羊耳成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)染人血清白蛋白基因轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化.pdf
- 利用鋅指核酶技術(shù)制備MSTN基因敲除的牛胎兒成纖維細(xì)胞.pdf
- 皮膚成纖維細(xì)胞構(gòu)建角膜基質(zhì)組織的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 利用CRISPR-Cas9敲除綿羊成纖維細(xì)胞MSTN基因的研究.pdf
- 奶牛胎兒成纖維細(xì)胞整合素αv基因敲除-沉默的研究.pdf
- 下咽壁成纖維細(xì)胞的體外構(gòu)建.pdf
- 人胚胎成纖維細(xì)胞構(gòu)建組織工程皮膚的研究.pdf
- 基因轉(zhuǎn)染成纖維細(xì)胞構(gòu)建組織工程化牙本質(zhì)的研究.pdf
- 低氧誘導(dǎo)因子-1α在良性氣道狹窄肉芽組織成纖維細(xì)胞的表達(dá).pdf
- 山羊耳尖成纖維細(xì)胞重編程為多能干細(xì)胞的研究.pdf
- β--catenin蛋白敲除對(duì)肺成纖維細(xì)胞活性影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- CRISPR-Cas9介導(dǎo)敲除內(nèi)蒙古白絨山羊胎兒成纖維細(xì)胞FGF5基因.pdf
- 體外培養(yǎng)人創(chuàng)面肉芽組織成纖維細(xì)胞生物學(xué)特性研究.pdf
- 皮膚成纖維細(xì)胞構(gòu)建組織工程化肌腱的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 皮膚成纖維細(xì)胞中dystrophin基因的表達(dá)研究.pdf
- 轉(zhuǎn)人α-乳白蛋白基因的奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞株的建立及轉(zhuǎn)基因奶山羊的鑒定.pdf
- 人臍帶結(jié)締組織的肌成纖維細(xì)胞.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論