牛胎兒成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染及其核移植的研究.pdf

1、內(nèi)蒙古大學(xué)碩士學(xué)位論文牛胎兒成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染及其核移植的研究姓名：李揚(yáng)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：動(dòng)物學(xué)指導(dǎo)教師：旭日干20030606童塹生墮些盛塹絲塑壁堡叢些莖：壁塑墨莖堡整苧塑竺窒一一——研究論文’牛胎兒成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染及其核移植的研究中文摘要本文用不同的方法體外培養(yǎng)牛胎兒成纖維細(xì)胞，通過FuGENE一6介導(dǎo)，將真核表達(dá)載體pEGFPCl成功導(dǎo)入體外培養(yǎng)的牛胎兒成纖維細(xì)胞。經(jīng)過一定濃度的G418篩選，以轉(zhuǎn)基因細(xì)胞為核供

2、體，克隆到去核的牛卵母細(xì)胞質(zhì)中，從而構(gòu)建重構(gòu)胚。一、牛胎兒成纖維細(xì)胞的分離與體外培養(yǎng)I、本研究分別用膠原酶IIIlTEl(025％Trypsin一002％EDTA，025％胰蛋白酶002％乙二氨四乙酸)成功的分離了牛胎兒成纖維細(xì)胞，并對(duì)其進(jìn)行了體外培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，38。C，5％C02，飽和濕度條件下，用TEl消化時(shí)間不能過長(zhǎng)，時(shí)間控制在一小時(shí)左右，成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)最旺盛，原代培養(yǎng)時(shí)間最短；用工作濃度為150IU／ml膠原酶III，消化時(shí)間

3、控制在20小時(shí)左右，成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)增殖最旺盛，原代培養(yǎng)時(shí)間最短。2、用組織塊直接培養(yǎng)也成功的得到了牛胎兒成纖維細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)組織塊大小對(duì)成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)至關(guān)重要，接種大小范圍在13turn的組織塊成活率最高，并且原代培養(yǎng)時(shí)間最短，成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛。3、本研究通過繪制生長(zhǎng)曲線，可以研究牛胎兒成纖維細(xì)胞增殖規(guī)律：制備檢測(cè)傳至第6代的牛胎兒成纖維細(xì)胞染色體，隨機(jī)抽取26個(gè)細(xì)胞染色體計(jì)數(shù)，其中18個(gè)核型正常，為2N=60XX，表明所取牛胎兒