牛胎兒成纖維細胞體外培養(yǎng)、轉染及其核移植的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、內蒙古大學碩士學位論文牛胎兒成纖維細胞體外培養(yǎng)、轉染及其核移植的研究姓名：李揚申請學位級別：碩士專業(yè)：動物學指導教師：旭日干20030606童塹生墮些盛塹絲塑壁堡叢些莖：壁塑墨莖堡整苧塑竺窒一一——研究論文’牛胎兒成纖維細胞體外培養(yǎng)、轉染及其核移植的研究中文摘要本文用不同的方法體外培養(yǎng)牛胎兒成纖維細胞，通過FuGENE一6介導，將真核表達載體pEGFPCl成功導入體外培養(yǎng)的牛胎兒成纖維細胞。經過一定濃度的G418篩選，以轉基因細胞為核供

2、體，克隆到去核的牛卵母細胞質中，從而構建重構胚。一、牛胎兒成纖維細胞的分離與體外培養(yǎng)I、本研究分別用膠原酶IIIlTEl(025％Trypsin一002％EDTA，025％胰蛋白酶002％乙二氨四乙酸)成功的分離了牛胎兒成纖維細胞，并對其進行了體外培養(yǎng)。結果發(fā)現(xiàn)，38。C，5％C02，飽和濕度條件下，用TEl消化時間不能過長，時間控制在一小時左右，成纖維細胞生長最旺盛，原代培養(yǎng)時間最短；用工作濃度為150IU／ml膠原酶III，消化時間

3、控制在20小時左右，成纖維細胞生長增殖最旺盛，原代培養(yǎng)時間最短。2、用組織塊直接培養(yǎng)也成功的得到了牛胎兒成纖維細胞，實驗發(fā)現(xiàn)組織塊大小對成纖維細胞原代培養(yǎng)至關重要，接種大小范圍在13turn的組織塊成活率最高，并且原代培養(yǎng)時間最短，成纖維細胞生長旺盛。3、本研究通過繪制生長曲線，可以研究牛胎兒成纖維細胞增殖規(guī)律：制備檢測傳至第6代的牛胎兒成纖維細胞染色體，隨機抽取26個細胞染色體計數(shù)，其中18個核型正常，為2N=60XX，表明所取牛胎兒

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