樹突狀細胞與白細胞介素18基因修飾的NCI-H460肺癌細胞融合體抗腫瘤作用實驗研究.pdf

1、浙江大學博士學位論文樹突狀細胞與白細胞介素18基因修飾的NCIH460肺癌細胞融合體抗腫瘤作用實驗研究姓名：張在云申請學位級別：博士專業(yè)：腫瘤學指導教師：吳金民2003.4.1浙江大學博士學位論文樹突狀細胞與白細胞介素18基因修飾的NCIH460肺癌細胞融合體抗腫瘤作用實驗研究浙江大學醫(yī)學院腫瘤學2000級博士研究生張在云導師吳金民教授中文摘要㈣(Dendriticcells，DC是目前所知功能最強的抗原呈遞細胞(Antigenpres

2、entingcells，APC)，在機體的抗腫瘤免疫中具有重要作用。基于DC的腫瘤疫苗成為腫瘤免疫學研究的熱點。Dc疫苗的構建方法包括Dc體外擴增后回輸，細胞因子基因修飾Dc，抗原基因轉染Dc，腫瘤細胞mRNA沖擊Dc、腫瘤抗原多肽沖擊Dc、腫瘤細胞裂解物沖擊Dc、腫瘤細胞與Dc融合等。其中腫瘤細胞與DC融合更具優(yōu)勢，較為理想。白細胞介素(Interleukin，IL)一12、IL一7、IL—18、粒巨噬細胞集落刺激因子(Granulo

3、cytemacmphagecolonystimulatingfactorGMCSF)等細胞因子具有較強的免疫促進作用，與Dc疫苗聯用有望提商Dc疫苗的免疫效力，其中IL—18為多效性細胞因子，具有顯著的抗腫瘤作用，將IL18基因修飾與DC疫苗相結合可能會增強DC疫苗的免疫效應。為探索更為高效的Dc瘤苗，本實驗將腫瘤抗原、Dc的抗原呈遞功能和細胞因子IL一18的免疫刺激活性相結合，構建含IL一12P40信號肽序列的I卜18融合基因，以其轉

4、染NCIH460肺癌細胞株，將此轉基因細胞與Dc融合，刺激活化T細胞，研究其在體外及動物體內的抗腫瘤作用，并與未轉染融合細胞及NCIH460細胞裂解物沖擊Dc誘導的T細胞的作用比較，以明確IL18修飾的Dc融合疫苗誘導的免疫作用是否優(yōu)于后二者。本實驗分為五部分：第一部分Dc的誘導培養(yǎng)和鑒定分離外周血單個核細胞(PeripheralbloodmonoeuclearcellPBMC)，經貼壁獲得單核細胞，用含GMCSF和IL4的培養(yǎng)液恒溫培