白細(xì)胞介素18基因修飾的成熟樹突狀細(xì)胞疫苗對(duì)哮喘小鼠的治療作用及其相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、過敏性哮喘是以嗜酸性粒細(xì)胞增多、粘液分泌過多和氣道高反應(yīng)性為特點(diǎn)的慢性氣道炎癥，最終導(dǎo)致肺臟結(jié)構(gòu)發(fā)生異常。 目的:觀察Th1型細(xì)胞因子IL-18基因修飾的抗原特異性成熟樹突狀細(xì)胞疫苗對(duì)BALB/c小鼠過敏性哮喘的療效并探討其可能機(jī)制，為探討過敏性哮喘治療新方法提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法1.髓系mDC制備及基因修飾：取6-8周齡BALB/c小鼠，無菌分離股、脛骨，沖洗骨髓。將收集到的骨髓細(xì)胞破紅細(xì)胞后置DC培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)至第7

2、天以LPS和OVA刺激，10h后收獲細(xì)胞，得nDCOVA，獲得的mDCOVA以MOI=1∶100的比例與AdLacZ或AdIL-18在無血清培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)2小時(shí)即為基因修飾的DC疫苗，分別命名為L(zhǎng)acZ-mDCOVA及IL-18-mDCOVA。 2.建立小鼠過敏性哮喘模型：BALB/c品系小鼠，每批6組(n=10/組)：正常對(duì)照組；PBS陰性對(duì)照組；DXM陽性對(duì)照組；mDCOVA治療組；LacZ-mDCOVA治療組；IL-18

3、-mDCOVA治療組。上述各組除正常組外均注射0.1％卵白蛋白氫氧化鋁凝膠溶液，每只小鼠兩后足足墊注射，每側(cè)50μl，10天后，等量0.1％卵白蛋白氫氧化鋁凝膠溶液作腹腔注射加強(qiáng)致敏。第15天開始置小鼠于密閉容器內(nèi)，以10％卵白蛋白生理鹽水溶液霧化攻擊，每天1次，每次0.5小時(shí)，連續(xù)進(jìn)行7天。 3.mDCOVA、LacZ-mDCOVA、IL-18-mDCOVA對(duì)過敏性哮喘的作用：為觀察DC疫苗免疫次數(shù)對(duì)療效的影響，我們將實(shí)驗(yàn)鼠分

4、為一次免疫組及二次免疫組：一次免疫組即在造模前7天每只小鼠雙側(cè)腹股溝皮下注射(s.c.)1.0×106的mDCOVA、LacZ-mDCOVA或IL-18-mDCOVA一次；二次免疫組分別在造模前21天和造模前1天每只小鼠雙側(cè)腹股溝s.c.1.0×106的mDCOVA、LacZ-mDCOVA、IL-18-mDCOVA各一次。于霧化攻擊結(jié)束后4周對(duì)兩批實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行處理，對(duì)所獲樣本進(jìn)行分析。對(duì)肺泡灌洗液(BALF)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)和嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)

5、數(shù)；用ELISA測(cè)定過敏性哮喘模型脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中Th1、Th2型細(xì)胞因子濃度；RT-PCR測(cè)定實(shí)驗(yàn)小鼠肺組織IFN-γ等mRNA的表達(dá)；流式細(xì)胞儀分析實(shí)驗(yàn)動(dòng)物脾細(xì)胞內(nèi)CD4+CD25+T調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例；留取肺組織作組織切片，觀察嗜酸性粒細(xì)胞浸潤和氣道粘膜杯狀細(xì)胞增生情況。 結(jié)論1.無論是抗原特異性成熟樹突狀細(xì)胞疫苗(mDCOVA)還是IL-18基因修飾的mDCOVA(IL-18-mDCOVA)對(duì)哮喘小鼠肺組織嗜酸性粒細(xì)胞浸潤

6、、氣道粘膜上皮杯狀細(xì)胞增生情況均有明顯改善，能在一定程度上緩解過敏性哮喘的病情，其中IL-18-mDCOVA疫苗效果較mDCOVA更佳，但以DC疫苗免疫一次和兩次療效相似。 2.mDCOVA及IL-18-mDCOVA均能對(duì)過敏性哮喘小鼠細(xì)胞因子的分泌產(chǎn)生影響，即促進(jìn)了Th1型細(xì)胞因子的分泌，減少了Th2型細(xì)胞因子的分泌；同時(shí)能增加肺組織IFN-γmRNA的表達(dá)，有利于糾正哮喘機(jī)體的Th1/Th2失衡，但兩者相比，IL-18-mD