FoxO3a在大鼠胚胎神經(jīng)細(xì)胞LTP過程中的早期表達(dá)變化的研究.pdf

1、目的：觀察Kcl刺激誘導(dǎo)大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞后不同時(shí)間點(diǎn)FoxO3a及與其表達(dá)調(diào)控相關(guān)的基因Ras、Raf、MEK、ERKl、ERK2、PI3K、Akt、P27kip及Bim表達(dá)的變化，初步探討FoxO3a與這九個(gè)基因的相互作用對(duì)活動(dòng)依賴性神經(jīng)細(xì)胞生長、存活的作用及影響。
　　方法：原代細(xì)胞培養(yǎng)獲取胎齡17 d大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞；收集胎齡11 d至出生1 d的大鼠腦皮質(zhì)組織；采用RT-PCR方法分別檢測(cè)Kcl刺激誘導(dǎo)的大鼠腦皮質(zhì)及不

2、同發(fā)育時(shí)期大腦皮質(zhì)組織中 FoxO3a以及相關(guān)九個(gè)基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：原代細(xì)胞培養(yǎng)顯示細(xì)胞狀態(tài)良好。RT-PCR顯示，在Kcl刺激誘導(dǎo)的大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞中：(1)FoxO3a、Ras、Raf、MEK、ERKl、ERK2、PI3K、Akt、P27kip及BimmRNA在各組不同時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)細(xì)胞中均有表達(dá)；(2)FoxO3a mRNA在Kcl刺激誘導(dǎo)后30 min、3 h表達(dá)均低于正常對(duì)照組(P<0.05)，且30

3、min表達(dá)最低，12h表達(dá)最高；(3)Ras mRNA在Kcl刺激誘導(dǎo)后30min表達(dá)最低，3h表達(dá)最高，在6h、12h較正常對(duì)照組表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；(4)Raf mRNA在Kcl刺激誘導(dǎo)后30 min、6 h、12 h表達(dá)均低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；(5)MEK mRNA在刺激誘導(dǎo)后3 h表達(dá)最高，在30 min、6 h、12 h表達(dá)均低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；(6)

4、ERK1在Kcl刺激誘導(dǎo)后30 min、12 h表達(dá)均低于正常對(duì)照組(P<0.05)，在3 h表達(dá)最高，在6 h的表達(dá)下降，且與正常對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；(7)ERK2在Kcl刺激誘導(dǎo)后30 min、12 h表達(dá)均低于正常對(duì)照組(P<0.05)，在3 h表達(dá)最高，在6 h表達(dá)下降，且與正常對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；(8)PI3K在 Kcl刺激誘導(dǎo)后30 min、12 h表達(dá)均低于正常對(duì)照組(P<0

5、.05)；在3 h、6 h表達(dá)均高于正常對(duì)照組(P<0.05)，且3 h表達(dá)最高；(9)Akt在Kcl刺激誘導(dǎo)后3 h表達(dá)最高，在30 min、6 h、12 h表達(dá)均低于正常對(duì)照組(P<0.05)；(10)P27kip在 Kcl刺激誘導(dǎo)各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)均低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；(11)Bim在Kcl刺激誘導(dǎo)12 h的表達(dá)低于正常對(duì)照組(P<0.05)，30 min、3 h、6 h的表達(dá)與正常對(duì)照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)