幾種免疫促進劑對菲律賓蛤仔（Ruditapes philippinarum）酚氧化酶的產(chǎn)量和活性以及血細胞的數(shù)量和超微結(jié)構(gòu)的影響.pdf

1、許多免疫促進劑均能不同程度地增強無脊椎動物的自身免疫力，研究其對水產(chǎn)養(yǎng)殖貝類免疫系統(tǒng)的影響及其作用機制，對貝類免疫學(xué)具有重要的理論意義；而篩選出高效的免疫促進劑，對提高養(yǎng)殖貝類的自身免疫力、降低其死亡率、進而提高養(yǎng)殖效益，還具有十分重要的應(yīng)用價值。目前已有采用免疫促進劑提高中國對蝦自身免疫力的相關(guān)細胞和分子作用機理的研究報道，但在菲律賓蛤仔中尚未見有研究報道。 本文以菲律賓蛤仔(Ruditapes philippinarum)的

2、血淋巴為材料，采用脂多糖(LPS)、β-葡聚糖(β-1，3-glucan)、滅活哈維氏弧菌和滅活鰻弧菌四種免疫促進劑對菲律賓蛤仔進行了免疫刺激，利用離子交換柱層析和凝膠過濾柱層析對酚氧化酶(phenoloxidase，PO)進行了分離純化，并以L-二羥苯丙氨酸(L-DOPA)作為特異性底物對其酶活性進行了測定，對上述免疫促進劑對菲律賓蛤仔PO產(chǎn)量及活性的影響進行了研究。 對經(jīng)LPS、β-葡聚糖、滅活哈維氏弧菌和滅活鰻弧菌刺激前后

3、菲律賓蛤仔血淋巴中酚氧化酶純化樣品的蛋白濃度及酶活性的研究結(jié)果顯示，經(jīng)上述四種免疫促進劑刺激后菲律賓蛤仔酚氧化酶的產(chǎn)量分別提高了103.45％、65.52％、17.24％和27.59％，總酶活性分別提高了105.9％、64.7％、17.65％和29.41％，單位酶活性幾乎沒有變化。表明四種免疫促進劑均能不同程度促進菲律賓蛤仔酚氧化酶總酶活性提高，且這種促進作用是通過提高酚氧化酶產(chǎn)量來完成的。四種免疫促進劑中β-葡聚糖對菲律賓蛤仔酚氧化酶

4、的產(chǎn)量和總酶活性促進作用最大。 以菲律賓蛤(Ruditapes philippinarum)的血淋巴為材料，采用脂多糖(LPS)、β-葡聚糖(β-1，3-glucan)、滅活哈維氏弧菌和滅活鰻弧菌四種免疫促進劑對菲律賓蛤仔進行了免疫刺激，利用血細胞計數(shù)、透射電鏡觀察對刺激前后菲律賓蛤仔血細胞的數(shù)量、超微結(jié)構(gòu)進行了系統(tǒng)研究。血細胞計數(shù)結(jié)果表明，經(jīng)上述四種免疫促進劑刺激后的菲律賓蛤仔總血細胞數(shù)量分別增加了42.7％、39.56％、4

5、2.0％和83.0％；小顆粒細胞數(shù)量分別增加了49.49％、41.08％、44.78％和69.02％，說明四種免疫促進劑均能不同程度促進菲律賓蛤仔血細胞的增殖，且血細胞數(shù)量的增加主要是通過小顆粒細胞數(shù)量的增加實現(xiàn)的。四種免疫促進劑中滅活鰻弧菌對增加菲律賓蛤仔總血細胞數(shù)量和小顆粒細胞數(shù)量的能力最強。對LPS和β-葡聚糖刺激前后菲律賓蛤仔血細胞透射電鏡結(jié)果的觀察，發(fā)現(xiàn)菲律賓蛤仔血細胞的超微結(jié)構(gòu)在免疫刺激后也發(fā)生了變化，三種血細胞的糙面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)

6、、核糖體和線粒體的數(shù)量均有一定程度的增加，其中以小顆粒細胞和大顆粒細胞的超微結(jié)構(gòu)變化幅度最大。經(jīng)滅活哈維氏弧菌和滅活鰻弧菌刺激后，菲律賓蛤仔小顆粒細胞超微結(jié)構(gòu)變化幅度較大，但大顆粒細胞超微結(jié)構(gòu)變化不明顯。說明LPS和β-葡聚糖主要通過增加血細胞數(shù)量、proPO激活系統(tǒng)組分蛋白的產(chǎn)量來增強菲律賓蛤仔免疫力，而滅活哈維氏弧菌和滅活鰻弧菌則通過增加大顆粒細胞及小顆粒細胞的數(shù)量，進而增加PO產(chǎn)量和血細胞的吞噬能力。 綜合研究結(jié)果可得出如

7、下結(jié)論：以上四種免疫促進劑之所以能夠增強菲律賓蛤仔自身免疫力，是通過刺激血細胞(主要為小顆粒細胞)數(shù)量增多、改變血細胞超微結(jié)構(gòu)，進而增加酚氧化酶產(chǎn)量，最終提高酚氧化酶的總酶活性來實現(xiàn)的。這是首次在國際上提出了LPS、β-葡聚糖、滅活哈維氏弧菌和滅活鰻弧菌對提高菲律賓蛤仔免疫力的細胞和分子作用機理，不僅對揭示貝類等無脊椎動物非特異性免疫機理具有重要的理論意義，而且為四種免疫促進劑應(yīng)用于貝類養(yǎng)殖業(yè)，增強養(yǎng)殖貝類免疫力，提供一定的理論基礎(chǔ)和科