樹狀DNA放大技術(shù)在臨床基因診斷中的應(yīng)用.pdf

1、一.應(yīng)用DDH對生殖道尖銳濕疣中HPV DNA的分型檢測人乳頭瘤病毒是一種嗜上皮性病毒,引起人類多種與皮膚、上皮和粘膜相關(guān)的病變.目前認(rèn)為該病毒家族包括至少80多種不同亞型.為建立一種新型、高特異性和高敏感性的病原體檢測方法,本文以生殖道尖銳濕疣中HPV 6/11型感染為研究對象.從手術(shù)切除的50例生殖道尖銳濕疣新鮮標(biāo)本和15例正常人血清中,提取總DNA,同時(shí)用樹狀DNA雜交(DDH)技術(shù)和PCR進(jìn)行HPV DNA的分型檢測.結(jié)果50例

2、尖銳濕疣中,以DDH方法檢測,感染HPV6型者20例,感染11型者24例,6/11型混合感染者3例,陰性3例,總檢測率達(dá)94％;以PCR方法檢測,HPV6型感染者21例,11型感染者24例,6/11型混合感染者3例,陰性2例,總檢測率為96％.15例正常人血清中,以DDH方法檢測,HPV感染的假陽性率為0％;以PCR檢測,假陽性率為6.67％.同時(shí),本文還以HPV陽性標(biāo)本對DDH方法做了敏感度的測定,結(jié)果陽性病例DNA檢測最低濃度為97

3、.28pg/ml.研究表明,DDH技術(shù)具有較高敏感性和高特異性,且成本較低,操作安全簡便,可適用于基層中小醫(yī)院較大樣本量篩查.二.應(yīng)用DDH原位雜交技術(shù)對宮頸癌中HPV DNA的分型檢測和細(xì)胞學(xué)定位目的通過檢測婦女宮頸癌中HPV的感染情況,探索建立一種敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好,且可以進(jìn)行組織和細(xì)胞定位的基因診斷方法.方法45例宮頸癌切片分別以HPV16、18型的3DNA探針行原位雜交,即樹狀DNA原位雜交(DDISH)技術(shù),檢測HP

4、V DNA感染并對其分型.4例正常子宮頸上皮為陰性對照;以HeLa細(xì)胞(HPV 18陽性)和SiHa細(xì)胞(HPV 16陽性)作陽性對照.結(jié)果45例宮頸癌患者中感染16型者16例,18型者9例,16/18型混合感染者12例,未檢出HPV感染者8例,總陽性率82.22％.4例正常宮頸上皮均未檢出HPV16、18型感染.HeLa細(xì)胞原位雜交結(jié)果示HPV 18(+)/HPV 16(-),SiHa細(xì)胞HPV 16(+)/HPV 18(-),符合兩