fish技術(shù)在臨床中的應(yīng)用

1、FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用,基因科技（上海）有限公司,一、如何正確選擇探針二、如何正確使用探針三、臨床應(yīng)用 —胃癌,一、如何正確選擇探針,FISH探針種類,染色體計數(shù)探針（CEP) 位點特異性標(biāo)識分子（LSI） 端粒探針,,Hicks DG, Tubbs RR. Assessment of the HER2 status in breast cancer by fluorescence in situ h

2、ybridization: a technical review with interpretive guidelines. Hum Pathol. 2005 Mar;36(3):250-61.,Ratio of HER2 gene to Chromosome 17 copy number Ratio <2; HER-2 gene amplification not observed Ratio ? 2; HER-2 gen

3、e amplification observed,PathVysion DNA Probes,LSI HER-2/neu & CEP 17,~225.7 kb,探針設(shè)計,檢測遺傳物質(zhì)的得與失在單個細(xì)胞核內(nèi)針對某個特定靶分子檢測到多于或少于2個探針信號被認(rèn)為異常,探針設(shè)計 - 雙色單融探針（DC /SF）,染色體、基因重排檢測—已知斷點的平衡易位,9,正 常,,,,,,,,,,,,,,,,,,異 常,,,,,,BCR,ABL,

4、BCR,22,,使用指導(dǎo)存在假陽性如一個細(xì)胞中信號疊加。,探針設(shè)計 - 雙色單融探針（DC /SF）,探針設(shè)計 - 雙色額外信號探針（ES）,很好地克服了雙色單融出現(xiàn)的假陽性,探針設(shè)計 - 雙色雙融探針（DC/DF）,使用指導(dǎo) 最敏感的探針（假陽性<1 %） 可用來檢測微小殘留性疾病 不足是對融合信號不能區(qū)分,,二、如何正確使用探針,CE認(rèn)證在歐洲，用于臨床診斷的醫(yī)療器械是需要的CE（CONFORMITE

5、 EUROPEENNE）認(rèn)證的。近年來，在歐洲經(jīng)濟區(qū)（歐洲聯(lián)盟、歐洲自由貿(mào)易協(xié)會成員國，瑞士除外）銷售的商品，CE標(biāo)志的使用越來越多，CE標(biāo)志加貼的商品表示其符合安全、衛(wèi)生、環(huán)保和消費者保護等一系列歐洲指令所要表達(dá)的要求。目前，Abbott（Vysis）大約有336種FISH探針通過CE認(rèn)證，并且這些探針具有廣泛的文獻(xiàn)支持（在產(chǎn)品說明書中列舉這些出文獻(xiàn)），這些文獻(xiàn)都客觀證明了Vysis FISH探針在實際臨床上的應(yīng)用的成功案例。例

6、如P53探針，Abbott（Vysis）搜集了7篇相關(guān)文獻(xiàn)證明該探針在不同情況下的臨床應(yīng)用的成功案例。再如應(yīng)用于產(chǎn)后診斷的DiGeorge探針，在其說明書里面例舉了8篇相關(guān)文獻(xiàn)能證明Abbott（Vysis）探針成功診斷新生兒中的DiGeorge綜合征的成功案例。,Abbott Molecular臨床產(chǎn)品,三、臨床應(yīng)用,肺癌,,少突膠質(zhì)瘤,Vysis 1p36/1q25 and 19q13/19p13 FISH Probe Kit,Hu

7、nan MDT Meeting26 Aug 2014,36,Company Confidential© 2014 Abbott,正常,缺失,惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤,惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤包括:WHO III 級 – 間變性星形細(xì)胞瘤，間變性少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤，間變混合性膠質(zhì)細(xì)胞瘤WHO IV 級 – 多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤是高度惡性的膠質(zhì)瘤， 占近15％的原發(fā)性腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤和 54%的所有神經(jīng)膠質(zhì)瘤 1,2.高

8、度侵襲性, 幾乎無法治愈，患者迅速死亡高度未分化因不可預(yù)知的化學(xué)敏感性，故具有治療挑戰(zhàn)性多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者的預(yù)后非常差32年總生存期: 26% 4年總生存期: 12%,37,National Comprehensive Cancer Network. Available at: www.nccn.org. Central Brain Tumor Registry of the United States. http://

9、www.cbtrus.org.Stupp R, et al. N Engl J Med. 2005;352:987-996.,形態(tài)學(xué)上，小細(xì)胞型膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和間變性少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤都屬中等細(xì)胞密度，形態(tài)單一的膠質(zhì)瘤；細(xì)胞膜清楚，胞質(zhì)透亮； 明顯活躍的核分裂、微血管增生或顯著壞死表明腫瘤小細(xì)胞型膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和間變性少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤的鑒別事關(guān)重要因為這兩種腫瘤的臨床表現(xiàn)和治療意義極其不同一些分子特征可用于鑒別小細(xì)胞型膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和間變

10、性少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤： 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤小細(xì)胞型幾乎普遍缺失10號染色體短臂 60%–70%的小細(xì)胞型膠質(zhì)母細(xì)胞瘤帶有EGFR 基因擴增相反的，間變性少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤幾乎無10q 缺失和 EGFR 基因擴增。大約60%的間變性少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤帶有1p/19q 雜合性缺失.,Vysis EGFR / CEP 7 FISH Probe Kit,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,39,Company Confidentia

11、l© 2014 Abbott,正常,擴增,10號染色體短臂缺失 10q Loss,10 號染色體短臂缺失在源發(fā)和繼發(fā)性多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤里其中一個重要的特征10 號染色體短臂缺失在間變性星形細(xì)胞瘤和多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤指示不良預(yù)后，生存期較短 PTEN 基因位于10號染色體短臂 (10q23), 其多肽具有對脂質(zhì)和蛋白質(zhì)的磷酸酶活性，也是其中一個在10號染色體短臂缺失與多形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤相關(guān)的候選基因在兒童多形性膠質(zhì)母細(xì)胞

12、瘤族群里10號染色體短臂缺失是唯一于患者不良預(yù)后相關(guān)的記物。EGFR 基因擴增, 1p/19q 雜合性缺失和 p16 基因缺失并不能提示兒童病患的預(yù)后相反，在成人病患里并不提供獨立的預(yù)后信息,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,40,Company Confidential© 2014 Abbott,Fallon et al. J Neuropathol Exp Neurol 2004; 63:31

13、4 322. Horbinski et al. Brain Pathology 2011; 21:57–73Nikiforova & Hamilton. Arch Pathol Lab Med. 2011;135:558–568,EGFR 擴增,EGFR 基因擴增在神經(jīng)膠質(zhì)瘤里只適用于鑒別診斷 。這基因改變不是個獨立的預(yù)后標(biāo)記物。EGFR 基因擴增是與多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤發(fā)病的相關(guān)的主要基因。EGFR 擴增基本上是GB

14、M的特殊病癥，微觀標(biāo)簽很容易認(rèn)出，來自GBM浸潤邊緣的組織有時可以顯示腫瘤的本質(zhì)，即使組織學(xué)標(biāo)準(zhǔn)不足以指定為WHO IV級。,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,41,Company Confidential© 2014 Abbott,Fallon et al. J Neuropathol Exp Neurol 2004; 63:314 322. Horbinski et al. Brain Pat

15、hology 2011; 21:57–73Nikiforova & Hamilton. Arch Pathol Lab Med. 2011;135:558–568,CDKN2A, p16,CDKN2A 基因是位于9號染色體長臂上, 9p21, 的一個腫瘤抑制基因CDKN2A 純合性缺失可見于11% II 級, 47% III 級, and 60% IV級腫瘤1 CDKN2A基因的純合性缺失被認(rèn)為是一種不良預(yù)后因子。

16、18%原發(fā)性腦膠質(zhì)瘤與43%復(fù)發(fā)性腦膠質(zhì)瘤中p16缺失的發(fā)現(xiàn)進一步證實了其與腫瘤進展的相關(guān)性 1,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,42,Company Confidential© 2014 Abbott,Fallon et al. J Neuropathol Exp Neurol 2004; 63:314 322. Horbinski et al. Brain Pathology 2011; 2

17、1:57–73Nikiforova & Hamilton. Arch Pathol Lab Med. 2011;135:558–568,新靶向治療?,ROS1基因重排陽性腫瘤對克唑替尼 crizotinib (賽可瑞 XALKORI) 有顯著的治療活性ROS1 是否成為膠質(zhì)母細(xì)胞瘤里的新的靶向治療的靶點？,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,43,Company Confidential©

18、 2014 Abbott,肉瘤,肉瘤簡介,骨和軟組織肉瘤是一組罕見且異質(zhì)性的腫瘤。在成人里占所有腫瘤的少于 5% ，在兒童里卻占大約10%1. 按照腫瘤細(xì)胞來源，這些腫瘤可分為兩大類1,2:原發(fā)于骨骨肉瘤 Osteosarcoma (硬骨部分中形成）軟骨肉瘤 Chondrosarcoma (軟骨中形成） 尤因氏肉瘤 Ewing‘s sarcoma (骨髓組織中形成）原發(fā)于其他的組織，也稱為i軟組織肉瘤 纖維肉瘤

19、Fibrosarcomas 和 惡性纖維組織細(xì)胞瘤 （在纖維組織中形成） 脂肪肉瘤 Liposarcomas 平滑肌瘤 Leiomyomas 和橫紋肌肉瘤 rhabdomyosarcomas (原發(fā)于肌肉）滑膜肉瘤 Synovial sarcoma （在關(guān)節(jié)周圍的組織，通常是膝蓋關(guān)節(jié)周圍的組織中形成）,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,45,Company Confidential© 20

20、14 Abbott,Osuna & de Alava. Reviews on Recent Clinical Trials 2009; 4:12-26.Antonescu. Histopathology 2006; 48:13-21.,肉瘤里的遺傳異常,肉瘤很難診斷，亞型往往難以區(qū)分。然而準(zhǔn)確診斷對評估預(yù)后以及選擇適當(dāng)?shù)寞煼ㄊ种匾?基于組織切片鏡檢的形態(tài)學(xué)診斷仍是肉瘤診斷的金標(biāo)準(zhǔn)輔助技術(shù)對于支持形態(tài)學(xué)診斷非常有用，

21、尤其是采用FISH或基于PCR方法的分子檢測。 所有肉瘤約有 1/3 具有特定復(fù)發(fā)性染色體易位的特征，從而導(dǎo)致高度特異性基因融合，采用上述分子檢測方法很容易檢測。 這些易位往往是唯一的細(xì)胞遺傳學(xué)異?，F(xiàn)象，且最可能具有致病重要性,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,46,Company Confidential© 2014 Abbott,Antonescu. Histopathology 200

22、6; 48:13-21.NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology. Soft Tissue Sarcomas, version2.2014.Osuna & de Alava. Reviews on Recent Clinical Trials 2009; 4:12-26.,肉瘤的分子診斷,以下情況下應(yīng)考慮分子診斷:在免疫組化或超微結(jié)構(gòu)研究結(jié)果未有定論是良性和惡性腫瘤時的鑒別

23、診斷 例如，F(xiàn)US易位檢測可區(qū)別低級別纖維粘液樣肉瘤和神經(jīng)束膜瘤或其他良性纖維性或神經(jīng)性細(xì)胞增生惡性類型的鑒別診斷例如，DDIT3 易位可用于鑒別兒童里的粘液樣脂肪肉瘤和脂肪母細(xì)胞瘤 驗證異常的臨床表現(xiàn)（例如，異常年齡組或腫瘤部位）或非典型的免疫組化結(jié)果例如，具有典型尤因氏肉瘤表型的腫瘤如果發(fā)生在老年人身上，或者如果存在于內(nèi)臟部位或不僅僅在病灶部位表達(dá)，則可能需要分子確認(rèn),Hunan MDT Meeting26 Aug 20

24、14,47,Company Confidential© 2014 Abbott,Antonescu. Histopathology 2006; 48:13-21.NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology. Soft Tissue Sarcomas, version2.2014.Osuna & de Alava. Reviews on Recent Clinical

25、 Trials 2009; 4:12-26.,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,48,Company Confidential© 2014 Abbott,Antonescu. Histopathology 2006; 48:13-21.,FOXO1,EWSR1,ALK,SS18,FUS/ DDIT3,粘液樣腫瘤的鑒別,粘液樣軟組織腫瘤的鑒別診斷通常較困難，原因是有許多腫瘤有重疊的組織學(xué)特征，尤其當(dāng)評

26、估基于較小的活檢標(biāo)本時 因這些腫瘤具有復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的潛在差異，故正確分類十分重要，手術(shù)前診斷可能影響手術(shù)和新輔助療法不同的復(fù)發(fā)性遺傳變異與不同的粘液樣腫瘤相關(guān)，即:骨骼外粘液樣軟骨肉瘤和粘液樣脂肪肉瘤中的EWSR1基因重排； 低級別纖維粘液樣肉瘤和粘液樣脂肪肉瘤中的FUS基因重排；以及粘液樣脂肪肉瘤中的DDIT3 (之前稱為CHOP) 基因重排，F(xiàn)US 作為伙伴基因。,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,

27、49,Company Confidential© 2014 Abbott,Downs-Kelly et al. Am J Surg Pathol 2008;32:8–13.Wang et al. Modern Pathology 2008; 21:1303–1310.Jain et al. Int J Clin Exp Pathol 2010;3(4):416-429.,粘液樣腫瘤的鑒別,FUS-DDIT3 重排是粘液樣

28、脂肪肉瘤的高靈敏度和特異性特征。形態(tài)相似的腫瘤里 （如，有大量粘液樣變化的分化良好的脂肪肉瘤或粘液樣纖維肉瘤）未有檢測到 FUS-DDIT3 重排基因在很少的粘液樣脂肪肉瘤中也可檢測到另一種易位，t(12;22)(q13;q12)，既是 EWSR1-DDIT3 重排 多數(shù)骨骼外粘液樣軟骨肉瘤病例攜帶t(9;22)(q31;q12) EWSR1-NR4A3 融合基因。其他涉及NR4A3基因的變體之前有人曾鑒定，包括t(9;17)(q3

29、1;q12) TAF15-NR4A3 融合基因和t(9;15) (q31;q21) TCF12-NR4A3 融合基因,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,50,Company Confidential© 2014 Abbott,Downs-Kelly et al. Am J Surg Pathol 2008;32:8–13,Vysis EWSR1 Break Apart FISH Probe Kit,

30、Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,51,Company Confidential© 2014 Abbott,正常的 EWSR1 基因,EWSR1 基因重排,Vysis DDIT3 Break Apart FISH Probe Kit,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,52,Company Confidential© 2014 Abbott,DDIT3 基因重排,

31、Vysis FUS Break Apart FISH Probe Kit,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,53,Company Confidential© 2014 Abbott,FUS 基因重排,Downs-Kelly et al. Am J Surg Pathol 2008;32:8–13,透明細(xì)胞肉瘤與惡性黑色素瘤的鑒別診斷,透明細(xì)胞肉瘤是一種罕見而獨特的腫瘤，好發(fā)于青少年和青年四肢遠(yuǎn)端的肌

32、腱和腱膜中 。透明細(xì)胞肉瘤很少發(fā)生在兒童人群，所報告的病例中只有2%發(fā)生在不到10歲的兒童身上。 透明細(xì)胞肉瘤也稱為軟組織黑色素瘤，原因是這種腫瘤顯示的表型特征與惡性黑色素瘤相似，包括存在黑色素，具有黑素體的超微結(jié)構(gòu)以及表達(dá)S-100蛋白質(zhì)和黑色素瘤相關(guān)標(biāo)志物的免疫表型。透明細(xì)胞肉瘤的鑒別診斷包括各種發(fā)生在成人和兒童身上的上皮腫瘤和間質(zhì)腫瘤。鑒別診斷包括原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性黑色素瘤、細(xì)胞型藍(lán)痣、惡性外周神經(jīng)鞘腫瘤（MPNST）、滑膜肉瘤(

33、SS)、纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤 (RMS) (尤其是腺泡狀 RMS)、平滑肌肉瘤、顆粒細(xì)胞瘤、腺泡狀軟組織肉瘤 (ASPS)，等等。多數(shù)透明細(xì)胞肉瘤病例中能檢測到特定的復(fù)發(fā)性染色體易位 t(12;22)(q13;q12) 或所產(chǎn)生的22q12 上 EWSR1 基因和 12q13 上 ATF1 基因的融合基因。,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,54,Company Confidential© 201

34、4 Abbott,Jain et al. Int J Clin Exp Pathol 2010;3(4):416-429.Patel et al. Modern Pathology 2005;18:1585–1590.Song et al. Pathology International 2010; 60: 608–613.,橫紋肌肉瘤的分子診斷,橫紋肌肉瘤 是兒童和小于15歲的青少年最常見的軟組織肉瘤通常以肌肉塊形式出現(xiàn)在四肢、

35、鼻竇或腹膜后腔橫紋肌肉瘤不同的組織學(xué)亞型包括腺泡狀（alveolar rhabdomyosarcoma）、胚胎性（embryonal rhabdomyosarcoma）和多形性 (pleomorphic rhabdomyosarcoma). 胚胎性橫紋肌肉瘤是最常見的橫紋肌肉瘤， 占大約70%，最常出現(xiàn)在頭部和頸部區(qū)域以及泌尿生殖道；腺泡狀橫紋肌肉瘤占大約21%，最常出現(xiàn)在四肢胚胎性和腺泡狀橫紋肌肉瘤的臨床表現(xiàn)極其不同。胚胎性腫

36、瘤有較良的預(yù)后 一些特異性的遺傳變異可用于鑒別腺泡狀橫紋肌肉瘤，與其與FOXO1基因重排有關(guān)：t(2;13)(q35:q14) PAX3/FOXO1A （~70% of ARMS）t(1;13)(p36;q14) PAX7/FOXO1A （~10% – 15% of ARMS）或其他變異,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,55,Company Confidential© 2014 Abbot

37、t,Downs-Kelly et al. Diagn Mol Pathol 2009;18:138–143.Jain et al. Int J Clin Exp Pathol 2010;3(4):416-429.Wexler & Ladanyi. J Clin Oncol 2010; 28:132126-2128.,Molecular Diagnosis of Rhabdomysarcomas,PAX/FOXO1

38、陽性ARMS的患者(ARMSp)預(yù)后明顯更差。 (A) 總體生存期；(B) 無事件生存期。融合基因陰性ARMS (ARMSn) 和胚胎性RMS (ERMS) 患者的生存期無明顯不同ARMSp 的轉(zhuǎn)移頻率百分比明顯高于ARMSn 或ERMS.,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,56,Company Confidential© 2014 Abbott,Wiliamson et al. J Clin

39、Oncol 2010;28:2151-2158,Vysis FOXO1 Break Apart FISH Probe Kit,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,57,Company Confidential© 2014 Abbott,Downs-Kelly et al. Diagn Mol Pathol 2009;18:138–143.,炎性肌纖維母細(xì)胞瘤與 ALK 基因重排,炎性肌纖維母細(xì)胞瘤 (

40、IMT) 是一種獨特的間質(zhì)瘤，其特征在于梭形細(xì)胞增生與炎性浸潤，好發(fā)于兒童和年輕人身上。通常出現(xiàn)在腹部，尤其是腹膜后腔或腸系膜，可能單發(fā)或多發(fā)，很少出現(xiàn)在其他軟組織部位。約50% of IMT涉及染色體 2p23 上的 ALK 基因重排。報道也曾描述 ALK 的非整倍性 - 在無重排情況下拷貝數(shù)增多。 ALK 的始終介入而且可與多個不同基因發(fā)生重排，意味著 ALK 組成性激活在IMT形成中的關(guān)鍵作用，以及這種激活中嵌合融合蛋白同源

41、二聚作用機制的重要性ALK 基因重排目前已是靶向治療其中一個重要的靶點,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,58,Company Confidential© 2014 Abbott,Butrynski et al. N Engl J Med. 2010; 363:1727–1733.Fisher. Virchows Arch 2010; 456:153–166.Jain et al. Int J

42、 Clin Exp Pathol 2010;3(4):416-429.,脂肪肉瘤中的 MDM2,分化良好脂肪肉瘤/非典型性脂肪瘤和去分化型脂肪肉瘤是老年人中最常見的惡性軟組織腫瘤。分化良好脂肪肉瘤/非典型性脂肪瘤和去分化型脂肪肉瘤可能很難與良性脂肪瘤和其他高級別肉瘤區(qū)分，尤其在缺乏分化良好脂肪肉瘤區(qū)域的穿刺活檢標(biāo)本上脂肪肉瘤內(nèi)常見環(huán)形染色體和巨大標(biāo)記染色體。這些異常的染色體是由12q13-15 區(qū)域的擴增組成，導(dǎo)致一些基因的擴增，包

43、括最顯著的MDM2擴增MDM2 通過降解TP53 在控制細(xì)胞周期和腫瘤生成中起著重要的作用。,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,59,Company Confidential© 2014 Abbott,Sirvent et al. Am J Surg Pathol 2007;31:1476–1489.Weaver et al. Modern Pathology 2008; 21:943–949.

44、,Vysis MDM2/CEP 12 FISH Probe Kit,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,60,Company Confidential© 2014 Abbott,正常,擴增,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,脂肪肉瘤中的 MDM2,,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,61,Company Confidential

45、© 2014 Abbott,,Weaver et al. Modern Pathology 2008; 21:943–949.,滑膜肉瘤的分子診斷,滑膜肉瘤占了5–14%軟組織肉瘤，通常發(fā)生在年輕人的四肢。 滑膜肉瘤屬于高度侵襲性腫瘤，主要轉(zhuǎn)移到肺部。約 90%滑膜肉瘤具有 t(X;18)(p11.2;q11.2)的特征，這是因18 號染色體上的 SS18基因 與 X 染色體上的 SSX 基因（SSX1、SSX2或SS

46、X4）發(fā)生融合。 尤因氏肉瘤和低分化小細(xì)胞型滑膜肉瘤是難以鑒別。二者均表達(dá) CD99 但缺乏細(xì)胞角蛋白。以 EWSR1 和 SS18 基因的分子診斷有助于區(qū)分這兩種腫瘤,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,62,Company Confidential© 2014 Abbott,Amary et al. Modern Pathology 2007; 20:482–496.Jain et al.

47、Int J Clin Exp Pathol 2010;3(4):416-429.,Vysis SS18 Break Apart FISH Probe Kit,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,63,Company Confidential© 2014 Abbott,FISH 在淋巴瘤里的臨床應(yīng)用,64,非霍奇金淋巴瘤 (NHL),NHL 的病理亞型超過30種B細(xì)胞來源占大約90%，其余為T/NK細(xì)

48、胞來源NHL 好發(fā)于淋巴結(jié)、胃腸相關(guān)淋巴組織等，亦可侵及骨髓和外周血大部分 NHL 都具有特定的遺傳學(xué)異常最新 WHO 分類明確指出各類亞型相關(guān)遺傳學(xué)異常，并作出說明其在診斷、預(yù)后方面的意義,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,65,Company Confidential© 2014 Abbott,小細(xì)胞 B-NHL,臨床侵襲性相對較低，但目前治愈率較低通常包括濾泡性淋巴瘤 FL （22%

49、）套細(xì)胞淋巴瘤 （6%）B-CLL/SLL （6%）淋巴漿細(xì)胞性淋巴瘤 （6%）邊緣區(qū)淋巴瘤 (NMZL, MALT , splenic, cutaneous) （5%）,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,66,Company Confidential© 2014 Abbott,,,,,,小細(xì)胞 B-NHL,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,68,Company C

50、onfidential© 2014 Abbott,常見淋巴瘤 — FL,FL 占 NHL 22 – 35%，僅次于DLBCL80 – 90% FL 患者存在 t(14;18)(q32;q21) IGH/BCL2 易位t(14;18) 陰性患者通常存在 BCL6 基因重排 (ABR)FL I~III級，惰性→高侵襲性FISH 在 FL 診斷中應(yīng)用：形態(tài)學(xué)不典型 - 濾泡結(jié)構(gòu)不清或消失免疫表型不典型 - CD10(-

51、)，Bcl2(-)樣本量不足（如穿刺等）- 無法觀察到明確的濾泡結(jié)構(gòu),Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,69,Company Confidential© 2014 Abbott,套細(xì)胞淋巴瘤(MCL),MCL 占 NHL ~6%50-70% 病例伴有 t(11;14)(q13;q32) CCND1(Cyclin D1)易位t(11;14)(q13;q32) 通常涉及 cyclin D1 (CC

52、ND1/PRAD1/BCL1) 基因和 IGH 基因CCND1過表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞周期調(diào)控紊亂，細(xì)胞過度增殖傳統(tǒng)細(xì)胞遺傳學(xué)方法只能檢出 70-75% t(11;14)(q13;q32)，但 FISH 方法可檢出率為 80-100%t(11;14)(q13;q32) 可用于CLL的鑒別診斷 – CLL， t(11;14)陰性,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,70,Company Confidential&

53、#169; 2014 Abbott,案例,63 歲，男性，多發(fā)淺表淋巴結(jié)腫大形態(tài)學(xué)濾泡結(jié)構(gòu)殘存細(xì)胞形態(tài)均一，染色質(zhì)深染，生發(fā)中心樣免疫表型CD20(+), CD79a(+)CD10(+), Bcl-6(+) （FL？）CD5(+), CD23(-), CyclinD1(+) （MCL？）,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,71,Company Confidential© 2014 Ab

54、bott,侵襲性B細(xì)胞淋巴瘤,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,72,Company Confidential© 2014 Abbott,臨床表現(xiàn)和病理特征多樣WHO 2008 分類列出多種亞型,Jaffe & Pittaluga. Hematology Am Soc Hematol Educ Program. 2011;2011:506-14.,,,,WHO/NCCN 指南相關(guān)的遺傳學(xué)特

55、征： BCL2 重排 BCL6 重排 MYC 重排,,,,,,,彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤 (DLBCL),DLBCL 占 NHL 中 30 - 40%根據(jù)來源分為GCB、non-GC，包含多種亞型，形態(tài)學(xué)、免疫表型、細(xì)胞遺傳學(xué)及分子特征各有不同最常見遺傳學(xué)異常：t(3q27) BCL6 rearrangement： 20 – 40%t(14;18)(q32;q21) IGH/BCL2： 10 – 40%t(8q34;14

56、q32) c-MYC/IGH：5 – 10%,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,74,Company Confidential© 2014 Abbott,伯基特淋巴瘤 (BL),BL 占 NHL ~2.5%需要與 DLBCL 鑒別診斷，治療方法迥異 遺傳學(xué)改變以 c-MYC 基因 (8q) 易位為主： t(8;14) ，c-MYC/IGH，75 - 85%； t(2;8)(p12;q24)

57、 ， IGK/MYC ，~5%； t(8;22)(q24;q11) ， IGL/MYC ，10%；5% - 10% DLBCL 患者亦可發(fā)生 t(8;14)，提示增殖活性, 進展快,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,75,Company Confidential© 2014 Abbott,BL vs. DLBCL,76,介于彌漫性大B 和伯基特之間的B-NHL并伴有多重易位 淋巴瘤（Double

58、-hit Lymphoma),WHO 2008 新分類通常歸入介于DLBCL和BL之間的灰區(qū)淋巴瘤 (B-cell lymphoma, unclassifiable, with features intermediate between DLBCL and BL) 并有伴多重易位 （Double-hit lymphoma)遺傳異常主要包括：MYC/8q24 基因重排并且伴有：BCL2/18q21 (最常見) 基因重排 和/或B

59、CL6/3q27 基因重排偶見t(8;14;18) 易位同時伴有 t(14;18) IGH/BCL2 和 8q34/c-MYC基因重排患者，臨床進展非?？欤A(yù)后極差,Hunan MDT Meeting26 Aug 2014,77,Company Confidential© 2014 Abbott,U-DLBCL/BL 伴多重易位,1972例 NHL 中篩選出 394例 DLBCL 伴有異常核型19例發(fā)現(xiàn)同時伴有 t(