新型轉(zhuǎn)基因標準物質(zhì)與標記基因檢測方法研究.pdf

1、轉(zhuǎn)基因篩查體系包括轉(zhuǎn)基因檢測標準物質(zhì)和轉(zhuǎn)基因檢測方法。轉(zhuǎn)基因篩查檢測標準物質(zhì)是轉(zhuǎn)基因篩查體系的物質(zhì)基礎，轉(zhuǎn)基因篩查檢測方法是轉(zhuǎn)基因篩查體系的技術基礎。
　　 鑒于制作基體型標準物質(zhì)的轉(zhuǎn)基因材料很難獲得和質(zhì)粒型標準物質(zhì)容易污染檢測環(huán)境，而且價格昂貴，本研究嘗試研制一種既具有基體型標準物質(zhì)和質(zhì)粒型標準物質(zhì)的優(yōu)點又克服它們?nèi)秉c的新型標準物質(zhì)。通過把含有植物轉(zhuǎn)基因通用元件以及油菜、玉米、水稻、甜菜、大豆和馬鈴薯的內(nèi)標準基因的陽性質(zhì)粒轉(zhuǎn)入

2、模式植物煙草，發(fā)展成為新型標準物質(zhì)。用卡那霉素作為篩選選擇壓，獲得了擁有卡那霉素抗性的陽性煙草植株。研究顯示，轉(zhuǎn)基因煙草含有所有轉(zhuǎn)基因通用元件的檢測靶標序列，可以較好充當轉(zhuǎn)基因檢測的陽性對照用于轉(zhuǎn)基因成分的篩查工作。
　　 本研究還分析了商業(yè)化轉(zhuǎn)基因品種的分子特征與元件分布，選取應用頻率高或在未來應用潛力大的標記基因NPTII、PAT、CP4-EPSPS、Bar、HPTII、GUS和PMI作為檢測靶標，建立了這7個基因的普通PC

3、R和實時熒光PCR檢測方法。
　　 本研究為轉(zhuǎn)基因成分檢測標準物質(zhì)研制提供了一個全新的思路，首次研制成功基于轉(zhuǎn)基因煙草的轉(zhuǎn)基因篩查用標準物質(zhì)，為克服現(xiàn)有標準物質(zhì)的缺點提供了可能。本研究還在我國建立了篩選標記基因的PCR檢測標準化體系，該體系已成為國家檢測標準。
　　 本研究取得以下主要研究結(jié)果：
　　 1）克隆了6類農(nóng)作物的10個內(nèi)標準基因；
　　 2）成功構(gòu)建包括11個轉(zhuǎn)基因通用元件和6類農(nóng)作物的10個