藥物與血清白蛋白的相互作用及蛋白質(zhì)新分析方法的研究.pdf

1、血清白蛋白作為一種儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)鞍?，是血漿中含量最豐富的蛋白，它能和許多內(nèi)源性或外源性物質(zhì)結(jié)合。研究其與藥物分子的相互作用，不僅對(duì)于闡明藥物的運(yùn)輸與代謝過(guò)程非常有意義，而且對(duì)于闡明藥物機(jī)理，藥物動(dòng)力學(xué)和藥物毒性非常重要。熒光技術(shù)是研究血清白蛋白與藥物相互作用的重要手段。 蛋白質(zhì)是生命活動(dòng)的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是構(gòu)成人體新生組織，維持人體健康的重要組成成分。奶產(chǎn)品中蛋白質(zhì)的含量直接決定其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和質(zhì)量，因此，研究奶產(chǎn)品中蛋白質(zhì)的含量成為食品

2、領(lǐng)域中的一個(gè)熱門(mén)話題。毛細(xì)管電泳(CE)以其分離效率高、分析時(shí)間短、樣品需要量少、操作費(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn)，日益成為一種高效分離分析方法，廣泛用于蛋白質(zhì)的分析。在查閱文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，本論文進(jìn)行了以下方面的研究工作： (1)采用熒光光譜法(FS)和紫外光譜法(UV)研究了士的寧與牛血清白蛋白(BSA)的相互作用，確定了靜態(tài)猝滅和非輻射能量轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致士的寧對(duì)BSA熒光猝滅的兩大原因，求得了士的寧對(duì)BSA的表觀結(jié)合常數(shù)KA分別為3.72×10<

3、'3>(27℃)，4.27×104(37℃)，4.47×10<'3>(47℃)，結(jié)合位點(diǎn)數(shù)n為1.01±0.03及二者間的結(jié)合距離r為3.795 nm，能量轉(zhuǎn)移效率E為0.0338。同時(shí)利用同步熒光光譜探討了士的寧對(duì)牛血清白蛋白構(gòu)象的影響。根據(jù)熱力學(xué)函數(shù)確定了士的寧與BSA之間主要是靠疏水力相互作用，而且它們之間的結(jié)合是自發(fā)進(jìn)行的。 (2)建立了非競(jìng)爭(zhēng)性毛細(xì)管電泳免疫法測(cè)定牛初乳制品中免疫球蛋白G(IgG)含量的新方法。該方法采

4、用FITC-PrG作為熒光探針通過(guò)非共價(jià)鍵結(jié)合的方式來(lái)標(biāo)記單克隆抗體，它們形成FITC-PrG-Ab，F(xiàn)ITC-PrG-Ab在適宜的溫育條件下與IgG的Fc區(qū)結(jié)合形成三明治式免疫復(fù)合物FITC-PrG-Ab-IgG，利用FITC-PrG-Ab-IgG的熒光信號(hào)作為定量分析的依據(jù)。以27 cm×50 μm毛細(xì)管作為分離柱，50 mmol/L硼酸+65g/L，聚乙二醇(PEG)20 000 pH=8.92為分離緩沖液，5 mmol/L硼酸p

5、H=8.74為樣品緩沖液，分離溫度25℃，分離電壓30 kV，利用激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器對(duì)含有IgG的牛初乳制品進(jìn)行分離檢測(cè)。該方法的線性范圍為：1～5 mg/L，最低檢出限為0.1 mg/L。該方法簡(jiǎn)單、快速，適合牛初乳制品中IgG含量的快速測(cè)定。 (3)建立了毛細(xì)管電泳法測(cè)定乳制品中α-乳白蛋白(α-Lac)的新方法。以77 cm×50 lam毛細(xì)管作為分離柱，0.5 mol/L硼酸，pH=8.35為分離緩沖液，以0.05 mo