腦發(fā)育不同階段蛋白質(zhì)組學(xué)及血清腦紅蛋白含量的研究.pdf

1、第一部分小鼠不同發(fā)育階段腦蛋白質(zhì)組學(xué)初步研究* 目的；本研究旨在建立腦蛋白質(zhì)組研究的技術(shù)平臺(tái)，獲得可靠的小鼠腦蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫(kù)，比較和評(píng)估小鼠不同發(fā)育階段的腦蛋白質(zhì)，為下一步進(jìn)行神經(jīng)系統(tǒng)疾病的蛋白質(zhì)組學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。 方法L樣品來(lái)源于國(guó)際腦蛋白質(zhì)組委員會(huì)所提供的胚胎16天、出生后7天及生后60天等3個(gè)發(fā)育時(shí)期的C57/B16雌性小鼠腦組織。常規(guī)方法提取組織總蛋白，采用固相pH梯度的二維電泳分離和串聯(lián)質(zhì)譜分析等進(jìn)行鑒定，使用

2、Mascot軟件搜索UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)，鑒定蛋白種類。 結(jié)果；獲得3個(gè)不同發(fā)育時(shí)期小鼠腦組織蛋白質(zhì)表達(dá)譜，完成國(guó)際腦蛋白質(zhì)組計(jì)劃的預(yù)實(shí)驗(yàn)所要求的質(zhì)量控制，鑒定出3個(gè)發(fā)育階段均有較穩(wěn)定表達(dá)的4個(gè)蛋白點(diǎn)，包括α烯醇酶、磷蛋白質(zhì)P19及2個(gè)肌動(dòng)蛋白。經(jīng)進(jìn)一步評(píng)估后鑒定出隨年齡增大而豐度減低的C14orf166同源蛋白、28×103熱/酸穩(wěn)定的磷蛋白、40S核糖體蛋白及演變?yōu)榫o鄰雙點(diǎn)的3-巰基丙酮酸硫基轉(zhuǎn)移酶。其中α烯醇酶及C14or

3、f166同源蛋白曾有文獻(xiàn)報(bào)道與神經(jīng)發(fā)育及組織發(fā)生有密切相關(guān)。并通過(guò)蛋白免疫印跡技術(shù)對(duì)不同發(fā)育階段的α烯醇酶進(jìn)行了驗(yàn)證。 結(jié)論；蛋白質(zhì)組學(xué)的方法為腦發(fā)育研究提供了有參考價(jià)值的數(shù)據(jù)，其差異蛋白的發(fā)現(xiàn)可促進(jìn)對(duì)神經(jīng)發(fā)育機(jī)制的了解，并將為后續(xù)啟動(dòng)神經(jīng)系統(tǒng)疾病蛋白質(zhì)組學(xué)研究提供參考。 第二部分新生兒血清腦紅蛋白檢測(cè)及臨床意義的研究** 新近發(fā)現(xiàn)的腦紅蛋白(NGB)是機(jī)體第三類攜氧球蛋白，主要參與氧在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的轉(zhuǎn)運(yùn)與貯存

4、，缺氧可以誘導(dǎo)其表達(dá)的升高，當(dāng)腦缺氧時(shí)，可提高神經(jīng)元耐受缺氧性損傷。因此建立雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)的檢測(cè)方法，對(duì)足月正常產(chǎn)新生兒、宮內(nèi)胎兒窘迫、出生窒息及早產(chǎn)等新生兒血清樣本的NGB含量進(jìn)行檢測(cè)，觀察NGB在不同群體新生兒血清中的分布及動(dòng)態(tài)變化，以期為圍產(chǎn)期缺氧性腦損傷提供一種診斷的方法。 結(jié)果顯示：1.雙抗體夾心ELISA繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性相關(guān)r=0.9994983，最低檢測(cè)量為28.7ng/ml，批內(nèi)變異系數(shù)與

5、批間變異系數(shù)均小于15％。2.足月正常產(chǎn)新生兒出生時(shí)臍動(dòng)脈血清中NGB含量的平均值為27.35±4.41ng/ml，性別間比較無(wú)差異(P＞0.05)。3.宮內(nèi)窘迫新生兒臍動(dòng)脈血清中NGB含量明顯高于足月正常產(chǎn)新生兒(P＜0.01)；窒息新生兒臍動(dòng)脈血清中NGB含量高于足月正常產(chǎn)新生兒(P＜0.05)；早產(chǎn)兒臍動(dòng)脈血清中NGB含量明顯高于足月正常產(chǎn)新生兒(P＜0.01)。4.早產(chǎn)兒生后即給予肺表面活性物質(zhì)預(yù)防呼吸窘迫綜合征，治療組與未用藥

6、物的對(duì)照組在生后1小時(shí)、生后3小時(shí)兩者血清中NGB含量無(wú)明顯差異(P＞0.05)，于生后6小時(shí)，治療組血清中NGB含量明顯低于對(duì)照組(P＜0.05)。 結(jié)論：1.通過(guò)雙抗體夾心ELISA方法檢測(cè)血清中NGB的含量，結(jié)果準(zhǔn)確、客觀，靈敏度高，重復(fù)性好，已將操作標(biāo)準(zhǔn)化，可進(jìn)行大批量檢測(cè)工作。2.足月正常產(chǎn)新生兒臍動(dòng)脈血清中NGB含量極低，甚至檢測(cè)不到，且無(wú)明顯性別差異。3.宮內(nèi)窘迫的長(zhǎng)時(shí)間缺氧與產(chǎn)時(shí)窒息的急性缺氧，能引起新生兒臍動(dòng)脈