新型鵝細(xì)小病毒VP3抗體特異性ELISA檢測方法的建立.pdf

1、近年來，一種新型鵝細(xì)小病毒（GPV）在我國北方各省鴨群中出現(xiàn)并流行，導(dǎo)致發(fā)病鴨群出現(xiàn)短喙凸舌，生長遲緩等癥狀，命名為鴨短喙侏儒綜合征（BADS）。本研究建立了一種基于新型 GPV病毒 VP3結(jié)構(gòu)蛋白的間接酶聯(lián)免疫吸附實驗，檢測血清中的GPV抗體。大腸桿菌表達(dá)的GPV-VP3衣殼蛋白經(jīng)包涵體粗純化及鎳柱純化， Western blot實驗結(jié)果顯示純化后的蛋白可與 GP V抗體反應(yīng)。通過條件優(yōu)化：抗原包被最適濃度為100 ng/孔，4℃過夜

2、包被；使用復(fù)合封閉液封閉2 h；最佳一抗稀釋倍數(shù)為1：640，作用時間為1 h；辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記抗體稀釋倍數(shù)為1：10000，二抗反應(yīng)時間為1 h；TM D顯色時間為15 min，建立了一種基于 VP3蛋白檢測新型GPV抗體的間接 ELISA方法。特異性檢測顯示，該方法不與新城疫病毒、鴨肝炎病毒、鴨源呼腸孤病毒、禽流感病毒和傳染性法氏囊病毒有交叉反應(yīng)；靈敏性檢測結(jié)果顯示：待測血清10240倍稀釋后，仍可良好檢出 GPV特異性