鵝細(xì)小病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS1基因的克隆及原核表達(dá).pdf

1、鵝細(xì)小病毒(GooseParvovirus，GPV)是小鵝瘟的直接病原。臨床病理變化以消化道，尤其是小腸部位典型纖維性栓塞為特征。GPV是細(xì)小病毒科、細(xì)小病毒屬成員，屬自主復(fù)制型細(xì)小病毒。病毒基因組為單股、線性DNA，核苷酸序列長約5.1kb，含有兩個(gè)開放閱讀框架(ORF)，參與調(diào)節(jié)病毒生命周期的各個(gè)環(huán)節(jié)。　　檢索GenBank所發(fā)表的GPVB株全基因序列，借助PrimerPremier5.0和0ligo6.44軟件設(shè)計(jì)一對(duì)引物，采用

2、PCR技術(shù)擴(kuò)增GPVYZ株非結(jié)構(gòu)蛋白NSl基因，并與PMD18-T載體連接后測(cè)序。利用軟件DNAssist2.2對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行分析，結(jié)果表明：GPVYZ株非結(jié)構(gòu)蛋白NSl基因核苷酸全長1881bp，編碼627個(gè)氨基酸殘基。與GPVB株的NSl基因相比，核苷酸數(shù)目相同，有36個(gè)堿基、13個(gè)氨基酸的差異。二者核苷酸序列同源性為98.09％，推導(dǎo)氨基酸序列同源性為97.93％?！　Sl基因插入到原核表達(dá)質(zhì)粒PQE-30Xa的BamHⅠ、

3、SalⅠ多克隆位點(diǎn)之間，將重組原核表達(dá)質(zhì)粒PQE-30Xa-NSl轉(zhuǎn)化到大腸桿菌M15感受態(tài)細(xì)胞中，獲得表達(dá)NSl基因的陽性重組子，在含Amp的LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，用SDS-PAGE分析表達(dá)產(chǎn)物。結(jié)果表明：NSl基因在原核表達(dá)細(xì)菌大腸桿菌M15中獲得了高效表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物為約73ku的融合蛋白，表達(dá)量達(dá)菌體總蛋白的26.5％?！　?yīng)用蛋白質(zhì)分析軟件ANTHEPROT5.0對(duì)得到的GPVYZ株的NSl蛋白進(jìn)行蛋白序列