鴨α-干擾素核酸疫苗在鴨體內(nèi)的動(dòng)態(tài)分布及表達(dá)產(chǎn)物抗鴨瘟強(qiáng)毒效果初探.pdf

1、28日齡北京鴨分別通過(guò)肌肉注射50μg、100μg和200μg和基因槍轟擊免疫1μg、3μg和6μg鴨α-干擾素核酸疫苗(pcDNA-SDIFN-α)，同時(shí)設(shè)PBS和空載體pcDNA3.1(+)對(duì)照。免疫后不同時(shí)間分別采集鴨的血清以及全血和各部分組織(心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、法氏囊、胸腺、哈氏腺、胰臟、十二指腸、空腸、回腸、直腸、盲腸、腦和免疫注射部位的組織)。進(jìn)行如下研究：①建立一種能檢測(cè)pcDNA-SDIFN-α的實(shí)時(shí)熒光定量

2、PCR(FQ-PCR)方法，并應(yīng)用于pcDNA-SDIHN-α在免疫鴨體內(nèi)動(dòng)態(tài)分布的檢測(cè)。②pcDNA-SDIFN-α經(jīng)不同劑量不同途徑免疫鴨的體內(nèi)表達(dá)產(chǎn)物(免疫血清)抗鴨瘟強(qiáng)毒致鴨成纖維細(xì)胞病變的能力。獲得的結(jié)果如下： 1．建立的檢測(cè)pcDNA-SDIFN-α的FQ-PCR方法具有良好的特異性，重復(fù)性好，檢測(cè)的線(xiàn)性范圍寬，能檢測(cè)到7.7×10<'1>～7.7×10<'9>copies/μL，可用于對(duì)鴨體內(nèi)的pcDNA-SDIF

3、N-α進(jìn)行定量檢測(cè)。 2．通過(guò)肌肉注射和基因槍轟擊免疫鴨的各組織中均在免疫后1h檢測(cè)到pcDNA-SDIFN-α的分布，且含量最高的組織均是在免疫注射部位，其中肌肉注射免疫50μg、100μg和200μg組中最高拷貝數(shù)分別為9.1×10<'7>copies/g、1.48×10<'8>copies/g和1.78x10<'8>；基因槍免疫1μg、3μg和6μg組中最高拷貝數(shù)分別為1.0x10<'8>copies/g、2.51×10<

4、'8>copies/g和3.02×10<'8>copies/g。肌肉注射免疫與基因槍轟擊免疫均是良好的免疫方式。 3．除血液外，隨著免疫時(shí)間的推移，pcDNA-SDIFN-α組織中的含量達(dá)到最高后呈現(xiàn)逐漸減少的趨勢(shì)，免疫后前7d期間減少最明顯。210d除部分組織外，依然能夠檢測(cè)到核酸疫苗的存在，但含量很低，每克組織中pcDNA-SDIFN-α拷貝數(shù)僅有10<'1>左右。全血中的pcDNA-SDIFN-α含量一直較低，在1h-10

5、5d時(shí)，總體也呈減少趨勢(shì)，但拷貝數(shù)變化差異不顯著(P>0.05)；210d時(shí)與其他組織中的含量差異不顯著(P>0.05)。在整個(gè)檢測(cè)時(shí)間段，免疫部位pcDNA-SDIFN-α的含量減少的最多，減少了約6-7個(gè)數(shù)量級(jí)，其它組織中的含量也減少了約2.5個(gè)數(shù)量級(jí)。 4．不同劑量肌肉注射免疫組與基因槍轟擊免疫組各組織器官中pcDNA-SDIFN-α的含量呈現(xiàn)的總體規(guī)律為：肌肉組：200μg組>100μg組>50μg組；基因槍組：6μg組

6、>3μg組>1μg組，但差異均不顯著(P>0.05)。 5．PBS對(duì)照和空載體pcDNA3.1(+)對(duì)照組的各組織器官所有時(shí)間點(diǎn)均未檢測(cè)到pcDNA-SDIFN-α。 6．在免疫后1d-63d，表達(dá)產(chǎn)物作用于鴨胚成纖維細(xì)胞后，pcDNA-SDIFN-α試驗(yàn)組的鴨瘟病毒的含量均低于PBS和空載體對(duì)照組的病毒含量，且在免疫后3d到21d時(shí)的表達(dá)產(chǎn)物作用后，DPV病毒含量比對(duì)照組的減少最多，表明在免疫后3d到21d時(shí)的表達(dá)產(chǎn)物

7、抑制病毒的能力最明顯，最高抑制病毒量約10<'8>copies/100μL細(xì)胞中。肌肉注射組在7d時(shí)的表達(dá)產(chǎn)物有最高的抑制鴨瘟強(qiáng)毒的能力，基因槍免疫組在3d時(shí)的表達(dá)產(chǎn)物抑制鴨瘟強(qiáng)毒的能力最強(qiáng)。 7．不同劑量肌肉注射免疫組與基因槍轟擊免疫組表達(dá)產(chǎn)物抑制病毒能力：肌肉組：200μg組>100μg組>50μg組；基因槍組：6μg組>3μg組>1μg組。表明以相同的免疫方式核酸疫苗的表達(dá)產(chǎn)物量與注射劑量呈現(xiàn)正相關(guān)。 8．200μ