過表達Olig2促進大鼠羊膜上皮細胞向少突膠質(zhì)細胞分化的研究.pdf

1、目的：觀察Olig2基因過表達rAECs向少突膠質(zhì)細胞分化情況。
　　方法：從妊娠14～16d的SD大鼠胎盤中剝離羊膜，用胰蛋白酶消化法進行大鼠羊膜上皮細胞原代培養(yǎng)，使用Nestin、CD29和CD44等抗體通過免疫細胞化學(xué)和流式細胞術(shù)對細胞進行生物學(xué)鑒定。以新生大鼠脊髓組織中提取的總RNA為模版，采用RT-PCR方法獲得目的基因片段。通過公司構(gòu)建Olig2質(zhì)粒并進行測序驗證。使用脂質(zhì)體法將重組體pEGFP-N1-Olig2轉(zhuǎn)染r

2、AECs，利用免疫細胞化學(xué)法檢測轉(zhuǎn)染后rAECs中Olig2蛋白和少突膠質(zhì)細胞蛋白4(oligodendrocyte4，O4)的表達水平，結(jié)果采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析，數(shù)據(jù)以“均數(shù)±標(biāo)準差”(means±SD)表示，組間比較采用單因素方差分析(One-Way-ANOVA)，多個實驗組和一個對照組比較采用最小顯著差法(LSD)。P≤0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：1.培養(yǎng)的大鼠羊膜上皮細胞表達神經(jīng)前體細胞特異性

3、蛋白Nestin和骨髓間充質(zhì)干細胞表面標(biāo)記蛋白CD29和CD44，但是未成熟神經(jīng)元標(biāo)記蛋白β-Ⅲ-tublin、星形膠質(zhì)細胞標(biāo)記物膠質(zhì)纖維酸性蛋白(Glial Fibrillary Acidic Protein，GFAP)以及造血干細胞表面標(biāo)記蛋白CD34表達陰性。2.成功構(gòu)建過表達重組體pEGFP-N1-Olig2，測序分析證實了序列的正確性。3.免疫熒光細胞化學(xué)證實pEGFP-N1-Olig2成功轉(zhuǎn)染rAECs;與對照組比較Olig