SSR標(biāo)記在粳稻恢復(fù)基因Rf-1轉(zhuǎn)育、F-,1-純度和品種鑒定中的應(yīng)用.pdf

1、粳稻品種中不含有效恢復(fù)基因。粳稻恢復(fù)系是通過秈粳交，從秈稻中導(dǎo)入恢復(fù)基因而育成的?；謴?fù)基因的鑒別必須通過田間測(cè)恢來完成。利用分子標(biāo)記輔助選擇的方法選育粳稻恢復(fù)系，可以免去大量單株測(cè)交，提高恢復(fù)系的選育效率。本研究首先利用一套由六千辛A、六千辛B和8個(gè)同質(zhì)恢六千辛R株系組成的恢復(fù)基因近等基因系以及恢復(fù)基因供體77302-1和六千辛A/六千辛R的雜種F<,1>為材料，在前人的研究基礎(chǔ)上，篩選可用于恢復(fù)基因Rf-1分子標(biāo)記輔助選擇的實(shí)用SSR

2、標(biāo)記，然后通過配制測(cè)交組合，計(jì)算實(shí)用標(biāo)記擴(kuò)增帶型和田間測(cè)恢的符合率加以驗(yàn)證。再利用實(shí)用標(biāo)記輔助選擇將Rf-1基因?qū)氤Ｒ?guī)品種寧粳1號(hào)轉(zhuǎn)育正常胞質(zhì)的粳稻恢復(fù)系。同時(shí)還利用68個(gè)SSR引物對(duì)雜交粳稻的純度和粳稻常規(guī)品種的真實(shí)性鑒定進(jìn)行了初步的研究，主要結(jié)果如下： 1．從迄今已報(bào)道的12對(duì)與BT型粳稻恢復(fù)基因Rf-1連鎖SSR引物中篩選到位于第10條染色體上的SSR引物RM5629，在六千辛A和六千辛B中均擴(kuò)增出120bp的片段，在恢

3、復(fù)基因供體77302-1和8個(gè)同質(zhì)恢六千辛R中均擴(kuò)增出110bp的片段，在六千辛A/六千辛R的雜種F<,1>中擴(kuò)增出110bp和120bp的互補(bǔ)片段，表明RM5629可作為Rf-1分子標(biāo)記輔助選擇的實(shí)用SSR標(biāo)記。 2．利用SSR標(biāo)記RM5629對(duì)9個(gè)細(xì)胞核類型的同質(zhì)恢復(fù)系68個(gè)株系和8個(gè)非同質(zhì)恢復(fù)系及紫尖武粳進(jìn)行擴(kuò)增，并考查了上述材料與5個(gè)不育系測(cè)交F<,1>的田間自然結(jié)實(shí)率。結(jié)果：(1)6247R、武育粳3號(hào)R、六鹽189R

4、、六千辛R、157TR、4016R、4016LHR 7個(gè)細(xì)胞核類型的同質(zhì)恢、紫尖武粳和8個(gè)生產(chǎn)上應(yīng)用的非同質(zhì)恢復(fù)系的RM5629擴(kuò)增帶型與田間測(cè)恢的恢復(fù)能力符合率達(dá)100％；17個(gè)3726R株系有16個(gè)株系的RM5629擴(kuò)增帶型與田間測(cè)恢的恢復(fù)能力符合，符合率為94.1％；同質(zhì)恢復(fù)系秀水04R的RM5629擴(kuò)增帶型與田間測(cè)恢的恢復(fù)能力不相符。(2)在178個(gè)測(cè)交組合中選到7個(gè)綜合性狀表現(xiàn)比較突出的雜交組合：武3A/4016LHR-70、

5、武3A/157TR-68、六千辛A/157TR-68、武羌A/C堡、武羌A/湘晴、武羌．A/6427R-16、武羌A/R254。 3．以太湖流域正在廣泛應(yīng)用的粳稻恢復(fù)系R254作為恢復(fù)基因供體，與生產(chǎn)上正在大面積推廣的抗條紋葉枯病優(yōu)良常規(guī)粳稻品種寧粳1號(hào)雜交并與寧粳1號(hào)回交。在89株BC<,1>F<,1>群體中利用引物RM5629檢測(cè)出含恢復(fù)基因帶型的39株。從中選擇農(nóng)藝性狀與寧粳1號(hào)相似的11個(gè)單株分別與寧粳1號(hào)繼續(xù)回交，已得

6、到BC<,2>F<,1>種子用于進(jìn)行下一步回交轉(zhuǎn)育。 4.利用RM5629對(duì)江蘇省大面積種植的5個(gè)粳稻雜交組合進(jìn)行純度鑒定，不育系(保持系)均擴(kuò)增出120bp的片段，恢復(fù)系均擴(kuò)增出110bp的片段，雜種F<,1>種均擴(kuò)增出110bp和120bp兩個(gè)互補(bǔ)片段，RM5629可以作為這5個(gè)雜交組合F<,1>種子純度鑒定的實(shí)用標(biāo)記。但利用RM5629不能區(qū)分不同的組合。用另外的67對(duì)SSR引物對(duì)這5個(gè)組合進(jìn)行擴(kuò)增，結(jié)果表明：在67對(duì)引物

7、中有14對(duì)SSR引物能在雜種F<,1>表現(xiàn)為父母本互補(bǔ)帶型，不同組合間多態(tài)性頻率在8.8％～11.8％之間。引物RM224可以同時(shí)區(qū)分三個(gè)不同的組合，引物RM224在常優(yōu)1號(hào)雜種F<,1>中擴(kuò)增出160bp和130bp的兩條互補(bǔ)片段，在六優(yōu)1號(hào)和3優(yōu)18兩個(gè)組合的雜種F<,1>中均擴(kuò)增出130bp和140bp的兩條互補(bǔ)片段，在泗優(yōu)422雜種F<,1>中擴(kuò)增出145bp和160bp的兩條互補(bǔ)片段。 5.利用上述68對(duì)SSR引物對(duì)3