水稻白葉枯病菌廣西分離株中一個致病相關基因的鑒定.pdf

1、水稻白葉枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae，簡稱Xoo)是世界水稻生產(chǎn)中危害嚴重的兩種細菌性病害之一，其引發(fā)的水稻白葉枯病（Bacterial leaf blight，簡稱BLB）對我國水稻的產(chǎn)量造成了較大的影響。近幾年來，水稻白葉枯病菌菲律賓菌株PXO99A、日本菌株MAFF311018以及韓國菌株KACC10331都完成了測序并公布了全基因組序列，這使得研究人員可以更好的研究該病的致病機理。然而系統(tǒng)的研

2、究Xoo的致病機理，就需要運用功能基因組學研究的策略構建突變體庫。
　　為了挖掘水稻白葉枯病菌致病相關基因，本研究采用轉(zhuǎn)座子突變的技術，將EZ-Tn5轉(zhuǎn)座子通過電轉(zhuǎn)化的方法轉(zhuǎn)入到水稻白葉枯病菌廣西分離株Xoo K74中，共獲得了10873個突變體。隨機挑選了20個突變體進行Southern雜交實驗，結果顯示轉(zhuǎn)座子Tn5隨機單拷貝插入基因組中。運用剪葉法對600個突變體進行了致病力分析，獲得了12個致病

3、力明顯降低的突變菌株。通過定位，同源序列比對分析后發(fā)現(xiàn)，這些突變基因包括gumD、rfbD、hrpB1、Ⅱ型分泌系統(tǒng)等已知致病相關基因，其中還獲得了6株脂多糖基因簇相關基因。
　　脂多糖作為革蘭氏陰性菌細胞表面的重要組成部分，參與細胞膜的形成。而wxoC基因作為脂多糖基因簇中的一員，功能尚不明確。本研究獲得的兩株wxoC基因突變菌株M355、sp1，Southern雜交顯示Tn5單拷貝插入。通過反式功能互補實驗發(fā)現(xiàn)，CM355、C