骨橋蛋白在浸潤(rùn)性乳腺癌組織中的表達(dá)及其與VEGF、CD34的關(guān)系.pdf

1、實(shí)驗(yàn)背景及目的:
　　 乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤，據(jù)世界衛(wèi)生組織估計(jì)，全世界每年約有130萬(wàn)婦女發(fā)生乳腺癌，有50萬(wàn)婦女死于乳腺癌，乳腺癌已經(jīng)成為危害全球女性健康的第一殺手。近年來(lái)其發(fā)病率有逐年上升及年輕化的趨勢(shì)，尤其是滬、京、津及沿海地區(qū)，以上海為例，近30年來(lái)乳腺癌的發(fā)病率增加了3倍。乳腺癌中最常見(jiàn)的類型為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌，患者死亡的主要原因是復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移，乳腺癌一旦發(fā)生轉(zhuǎn)移后，患者的生存率將明顯降低。因此降低乳腺癌的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)

2、移是提高乳腺癌生存率與治愈率的主要途徑。
　　 OPN首先由Senger于1979年作為一種與惡性轉(zhuǎn)化有關(guān)的磷酸化蛋白提取的，近年來(lái)對(duì)它的研究日益深入。近些年來(lái)研究提示，它不僅在惡性腫瘤的診斷方面可能有價(jià)值，還與腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移及血管生成密切相關(guān)。我們采用免疫組化方法檢測(cè)OPN在89例浸潤(rùn)性乳腺癌組織中的表達(dá)，同時(shí)通過(guò)對(duì)CD34檢測(cè)，計(jì)算腫瘤微血管密度(MVD)，以探索OPN在乳腺癌中的表達(dá)與腫瘤血管生成的關(guān)系。旨在探討OPN在

3、乳腺癌中的表達(dá)與腫瘤血管生成中的地位和作用，為防治乳腺癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)尋找新的靶點(diǎn)。
　　 資料與方法:
　　 1.一般資料：選取第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長(zhǎng)海醫(yī)院乳腺外科、上海市黃浦區(qū)中心醫(yī)院乳腺外科2006年1月至2008年12月手術(shù)切除的乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌標(biāo)本89例；均為女性，年齡26～73歲，平均年齡53.8歲。89例病理切片均證實(shí)為乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌，均行乳腺癌改良根治術(shù)或乳腺癌保乳術(shù)，所有病例術(shù)前均未接受任何治療。按Scarff

4、-Bloom Richardson(SBR)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行組織學(xué)分級(jí)Ⅰ級(jí)22例；Ⅱ級(jí)36例；Ⅲ級(jí)31例。
　　 2.方法：所有標(biāo)本均用10％福爾馬林固定，常規(guī)行石蠟包埋連續(xù)切片，厚4um；采用Envision免疫組化染色法，染色結(jié)果由3名病理科醫(yī)師采用雙盲原則評(píng)定。鼠抗人單克隆抗體OPN購(gòu)自美國(guó)Santa-Cruz公司、鼠抗人單克隆抗體CD34購(gòu)自美國(guó)LabVision公司。OPN染色陽(yáng)性根據(jù)胞漿的染色程度及染色細(xì)胞百分率進(jìn)行評(píng)分

5、：基本不著色者為0分，著色淡者(黃色)為1分，著色深者(棕色以上)為2分；著色細(xì)胞占計(jì)數(shù)細(xì)胞百分率：＜5％為0分，5～25為1分，26～50為2分，＞50％為3分。將每張切片著色程度得分與著色細(xì)胞百分率得分各自相乘，為其最后得分(0～6分)。0～3分為陰性，4～6分為陽(yáng)性。VEGF陽(yáng)性細(xì)胞為細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜有棕黃色顆粒出現(xiàn)，每張切片選擇5個(gè)且有代表性的高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)腫瘤細(xì)胞，共計(jì)1000個(gè)細(xì)胞，陰性(-)：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)平均＜

6、10％；陽(yáng)性(+)：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)平均≥10％。參照Weidner等報(bào)道的方法進(jìn)行MVD計(jì)數(shù)，先在低倍鏡(40倍)下全面觀察切片選定癌組織內(nèi)血管密度最高處，然后在高倍鏡(200倍)下取3個(gè)視野分別計(jì)算所有染色的微血管，取3個(gè)測(cè)定值的平均數(shù)為該病例的MVD值。在計(jì)數(shù)微血管時(shí)，以與周圍腫瘤細(xì)胞和結(jié)締組織成份有明顯區(qū)別的任何一個(gè)染成棕色的血管內(nèi)皮或內(nèi)皮細(xì)胞簇作為一個(gè)血管計(jì)算，只要結(jié)構(gòu)不相連，其分枝結(jié)構(gòu)也作為一個(gè)血管計(jì)數(shù)。
　　 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)

7、處理：采用x2檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。統(tǒng)計(jì)處理由SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件包完成。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　 1.OPN在乳腺癌組織的表達(dá)：OPN陽(yáng)性表達(dá)主要均勻分布于胞漿，少量位于胞核，光鏡下呈棕黃色。本研究對(duì)象中，OPN陽(yáng)性51例，OPN陰性38例。
　　 2.OPN在乳腺癌中的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系：OPN在癌組織中的表達(dá)與評(píng)分，高分化者明顯低于低分化者，差異有顯著性(P＜0.05)；伴有轉(zhuǎn)移者O

8、PN表達(dá)與評(píng)分明顯高于不伴轉(zhuǎn)移者，差異有顯著性(P＜0.05)；OPN與患者年齡、腫瘤直徑均無(wú)明顯關(guān)系(P＞0.05)。
　　 3.VEGF在乳腺癌組織中的表達(dá)及其與OPN的關(guān)系：VEGF陽(yáng)性細(xì)胞為細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜有棕黃色顆粒出現(xiàn)：陰性(-)：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)平均＜10％；陽(yáng)性(+)：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)平均≥10％。本研究對(duì)象中，VEGF陽(yáng)性58例，VEGF陰性31例。其中OPN陽(yáng)性組VEGF陽(yáng)性者33例，OPN陰性組中VEGF陽(yáng)性者13例，O

9、PN陰性組中VEGF陽(yáng)性者25例，OPN陽(yáng)性組中VEGF陰性者18例。VEGF的表達(dá)在OPN陽(yáng)性組和陰性組之間差異有顯著性(P＜0.05)。
　　 4.MVD檢測(cè)CD34定位于血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿，呈棕黃色。所有的病例的血管內(nèi)皮細(xì)胞均為CD34染色陽(yáng)性。癌組織MVD值34～163個(gè)不等，平均為83.63個(gè)。
　　 5.OPN與MVD的關(guān)系乳腺癌組織中OPN表達(dá)陰性、陽(yáng)性兩組組中MVD值分別為(68.42±23.45)條/HP

10、、(94.96±31.03)條/HP；MVD值在OPN陽(yáng)性組和陰性組之間差異有顯著性(P＜0.05)。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)論:
　　 我們通過(guò)OPN和乳腺癌臨床指標(biāo)之間的分析發(fā)現(xiàn)，OPN在癌組織中的表達(dá)與癌組織腫瘤的分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性；OPN與患者年齡、腫瘤直徑均無(wú)明顯關(guān)系。我們還發(fā)現(xiàn)VEGF、 MVD值在OPN陽(yáng)性組和陰性組之間差異有顯著性，提示OPN可能參與了腫瘤血管生成的復(fù)雜的過(guò)程，并可能在其中發(fā)揮著重要的作用。我