慢病毒載體介導hTERT基因修飾人腮腺多形性腺瘤細胞的實驗研究.pdf

1、目的：建立人腮腺多形性腺瘤有限細胞系，探討建立永生化人腮腺多形性腺瘤細胞的實驗研究。
　　 方法：取人腮腺多形性腺瘤患者原發(fā)腫瘤進行原代培養(yǎng)，觀察細胞的形態(tài)特征，繪制細胞生長曲線，采用免疫細胞化學檢測細胞內(nèi)特異性抗原標志物(CK8、CK19、Calp、SMA、Vim)，對細胞進行鑒定；構(gòu)建pGC-FU-hTERT慢病毒載體，轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)的人腮腺多形性腺瘤細胞，通過繪制細胞生長曲線、并通過Realtime PCR、Western

2、Blot的方法在mRNA和蛋白水平上檢測hTERT的表達情況。
　　 結(jié)果：人腮腺多形性腺瘤細胞體外培養(yǎng)時間約80d，傳代至16代，細胞呈短梭形、多角形，腫瘤性腺上皮細胞角蛋白弱陽性，腫瘤性肌上皮細胞肌動蛋白、鈣調(diào)蛋白、波形蛋白陽性；轉(zhuǎn)染后人腮腺多形性腺瘤細胞hTERT mRNA表達量顯著上調(diào)，同時檢測到hTERT蛋白的表達，細胞增殖能力有一定程度的增強，生存周期有一定的延長，細胞表型未發(fā)生轉(zhuǎn)化。
　　 結(jié)論：人腮腺多形