腮腺多形性腺瘤及惡性腫瘤的唾液蛋白組學初探.pdf

1、目前臨床上已經(jīng)廣泛應(yīng)用化驗尿液等體液中的成分來進行疾病診斷。唾液是人體的一種外分泌液，主要由三對大唾液腺（腮腺、頜下腺、舌下腺）所分泌。唾液中的有機、無機成分非常豐富，中含有一千多種蛋白質(zhì)和大量的無機鹽。唾液能夠通過許多的無創(chuàng)性手段簡便快速獲取，然而，應(yīng)用唾液進行常規(guī)的疾病診斷目前還沒有實現(xiàn)。有研究證實，當機體存在系統(tǒng)性疾病或者口腔局部病變時，許多唾液蛋白的表達都將產(chǎn)生變化，例如:糖尿病、舍格倫綜合征、牙周炎以及口腔鱗狀細胞癌。那么，腮

2、腺作為分泌唾液的三大唾液腺之一，當其發(fā)生腫瘤時，唾液蛋白成分理論上會產(chǎn)生變化，這些改變對于腮腺腫瘤的診斷是否有參考價值呢？
　　為了探究腮腺多形性腺瘤(pleomorphic adenoma，PMA)和腮腺惡性腫瘤(parotid malignant tumors，PMT)存在時腮腺所分泌的唾液蛋白的表達異常，本實驗使用液相色譜電噴霧電離串聯(lián)質(zhì)譜(Liquid chromatographyelectrospray ionizati

3、on tandem mass spectrometry, LC-ESI-MS/MS)技術(shù)來對腮腺腫瘤患者的唾液蛋白進行蛋白組學對比分析，并使用ELISA技術(shù)進行差異蛋白驗證。
　　研究目的:
　　1.通過測定不同腮腺腫瘤患者及正常人群唾液蛋白組，找到能夠反應(yīng)腮腺腫瘤存在的蛋白標志物。2.證實質(zhì)譜檢測技術(shù)所鑒定的重要蛋白在唾液中真實存在。3.通過比較不同腮腺腫瘤患者唾液蛋白組分，找到具有代表性的標志物，輔助術(shù)前明確腫瘤良惡性或

4、腫瘤性質(zhì)。
　　實驗方法:
　　分別采集腮腺多形性腺瘤、腮腺惡性腫瘤及正常人群的腮腺唾液標本各5例，使用質(zhì)譜分析方法篩選差異表達蛋白。腫瘤組采集患側(cè)唾液樣本，正常對照組隨機采集一側(cè)，提取、純化唾液蛋白，超濾濃縮、裂解、脫鹽后，進行質(zhì)譜分析檢測，分析數(shù)據(jù)找出差異蛋白后，加大樣本量，使用ELISA試劑盒選擇性鑒定多形性腺瘤組顯著性增高的galectin-7。
　　實驗結(jié)果:
　　總共有21個蛋白在三組樣本間的表達量存

5、在1.5倍或更大改變。其中g(shù)alectin-7在PMA組中的表達量顯著性高于PMT組及對照組;SPARCLl(Hevin)在PMT組中的表達量顯著性低于PMA組及對照組;Azurocidin及ARPC4-TTLL3在PMA組和PMT組中的表達量顯著性高于對照組;Cystatin C和Lipocalin l在PMA組和PMT組中的表達量則顯著性低于對照組。
　　進一步對18個PMA樣本、6個正常樣品及5個惡性腫瘤樣本中的galect

6、in-7進行ELISA檢測，多個獨立樣本非參數(shù)檢驗及秩和檢驗分析結(jié)果顯示:唾液中g(shù)alectin-7含量在多形性腺瘤組中較對照組(P=0.002)及惡性腫瘤組(P=0.008)均顯著性增高，而對照組與惡性腫瘤組之間無顯著性差異(P=0.193)。
　　實驗結(jié)論:
　　1.質(zhì)譜檢測能夠特異性地篩選出腮腺腫瘤患者唾液中有顯著性改變的蛋白。2.通過質(zhì)譜檢測技術(shù)及ELISA檢測均證明，唾液galectin-7在多形性腺瘤組中表達明顯