大蒜素對同型半胱氨酸誘導(dǎo)的兔血管平滑肌細(xì)胞增殖作用的實驗研究.pdf

1、目的:1.觀察大蒜素(Allicin)對同型半胱氨酸(Hcy)誘導(dǎo)的兔血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)增殖的影響;2.觀察Allicin對體外培養(yǎng)的兔VSMCs增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)、c-myc及堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)表達(dá)的影響;3.為Allicin防治高同型半胱氨酸血癥(HHcy)及其所致的動脈粥樣硬化(AS)提供理論依據(jù)。方法:組織貼塊法培養(yǎng)原代兔VSMCs,采用差速貼壁法進(jìn)行純化,取對數(shù)生長期的第4-6代細(xì)胞用于實驗。

2、由Hcy誘導(dǎo)建立細(xì)胞增殖模型,將細(xì)胞隨機(jī)分為6組,對照組、Hcy組(只加Hcy,終濃度為1mmol/L)、Allicin組中加入Hcy(終濃度為1mmol/L)和不同濃度的Allicin(終濃度分別為10、5、2.5 ug/ml)、葉酸組加入Hcy(終濃度為1mmol/L)和葉酸(終濃度為5mmol/L)。通過MTT比色法檢測細(xì)胞的增殖活度,免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測PCNA的表達(dá)及Real-time PCR技術(shù)檢測c-myc、bFGF mR

3、NA的表達(dá)。結(jié)果:1、MTT檢測結(jié)果顯示,Hcy作用于VSMCs后,能誘導(dǎo)其增殖, Hcy組與對照組相比有顯著性差異(P＜0.01)。與Hcy組比較,不同濃度的Allicin均能明顯抑制VSMCs增殖(P＜0.01),并且呈劑量依賴關(guān)系,Allicin大中劑量組作用強(qiáng)于葉酸組(P＜0.01)。2、免疫細(xì)胞化學(xué)檢測結(jié)果顯示,鏡下觀察對照組PCNA陽性表達(dá)定位于胞核,呈現(xiàn)棕黃色。分析結(jié)果顯示:與對照組比較,Hcy組VSMCs的PCNA的表達(dá)

4、明顯增強(qiáng)(P＜0.01)。與Hcy組比較, Allicin大、中、小劑量組均能抑制PCNA蛋白的表達(dá),隨著Allicin濃度的增大,PCNA的表達(dá)逐漸減弱(P＜0.01),且Allicin大、中劑量組的抑制作用強(qiáng)于葉酸組(P＜0.01或P＜0.05)。3、Real-time PCR待測mRNA的表達(dá)結(jié)果顯示,與對照組相比,Hcy組可明顯使c-myc、bFGF表達(dá)上調(diào),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01),與Hcy組比較,Allicin大、

5、中、小劑量組均能明顯抑制Hcy誘導(dǎo)的VSMCs中的c-myc、bFGF mRNA表達(dá),并且隨Allicin濃度的增加,抑制作用增強(qiáng)(P＜0.01), Allicin大、中劑量組的作用均強(qiáng)于葉酸組(P＜0.05),Allicin小劑量組與葉酸組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論:Allicin能顯著抑制Hcy誘導(dǎo)的VSMCs的增殖,表現(xiàn)出劑量依賴效應(yīng);其作用機(jī)制可能與其下調(diào)PCNA蛋白、下調(diào)c-myc mRNA及bFGF mRNA