SAMP檢測(cè)方法的條件優(yōu)化及對(duì)HBV的檢測(cè)研究.pdf

1、核酸擴(kuò)增技術(shù)廣泛地應(yīng)用于痕量核酸的檢測(cè)中。本論文主要是對(duì)本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的一種單引物引發(fā)的核酸等溫?cái)U(kuò)增方法(Single Primer-triggered IsothermalAmplification for Double-stranded DNA detection，SAMP)進(jìn)行條件優(yōu)化，并利用此方法對(duì)實(shí)際樣品乙型肝炎病毒(HBV)進(jìn)行了檢測(cè)研究。
　　本論文采用正交試驗(yàn)法對(duì)聚合酶、切刻酶、引物用量以及反應(yīng)溫度進(jìn)行優(yōu)化，得到了最

2、優(yōu)的水平組合，聚合酶用量為0.05μL，切刻酶用量為0.4μL，引物濃度為5.0×10-7M以及溫度為55℃。然后，利用本方法在最優(yōu)的條件下對(duì)質(zhì)粒靶標(biāo)進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果顯示該方法可檢測(cè)到1.0×10-17 M，因此，該方法具有較好的檢測(cè)限。
　　本論文還采用了納米金比色的方法對(duì)擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行了分析。SAMP體系反應(yīng)35 min后，加入納米金進(jìn)行比色。結(jié)果顯示，高濃度的靶標(biāo)體系有著明顯的顏色變化，而低濃度的靶標(biāo)體系以及空白對(duì)照都沒有發(fā)生