銀屑病易感區(qū)域PSORS9精細(xì)定位及候選基因研究.pdf

1、第一部分銀屑病易感位點(diǎn)PSORS9精細(xì)定位 背景尋常性銀屑病是一種慢性炎癥性皮膚病，人群中患病率約為O．1．5％。本課題組先前對(duì)61個(gè)中國漢族尋常型銀屑病家系進(jìn)行了全基因組掃描，在6p21區(qū)域獲得強(qiáng)連鎖信號(hào)(maxNPL=4．58，p=0．000032)；在4q28-32區(qū)域獲得了提示性連鎖信號(hào)(maxNPL=3．69，p=0．00033)，被OMIM收錄并命名為PSORS9。該區(qū)域遺傳距離約為35cM，包含有300多個(gè)基因。

2、 目的:在中國漢族人群中精細(xì)定位4號(hào)染色體長臂上銀屑病易感位點(diǎn)PSORS9，為該區(qū)域內(nèi)銀屑病易感基因的克隆奠定基礎(chǔ)。 方法:用覆蓋4號(hào)染色體長臂4q28-32的13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記對(duì)151個(gè)尋常型銀屑病家系共759個(gè)體(包括404名患者和355名非患者)進(jìn)行基因組掃描研究。以GENEHUNTER軟件(2．0Version)對(duì)基因分型結(jié)果進(jìn)行參數(shù)和非參數(shù)連鎖分析；以平均發(fā)病年齡作為變量進(jìn)行序秩分層分析；以Genefinder1．

3、0軟件估算易感基因所在區(qū)域的可信區(qū)間及支持性區(qū)間。 結(jié)論:①進(jìn)一步證實(shí)先前連鎖分析結(jié)果：②將銀屑病易感區(qū)域PSORS9范圍縮小到不足7eM，該區(qū)域內(nèi)包含65個(gè)基因，其中已知基因53個(gè)，預(yù)測基因12個(gè)；③以銀屑病發(fā)病年齡作為分層標(biāo)準(zhǔn)，可降低遺傳異質(zhì)性對(duì)定位克隆的干擾，中國人群中兒童型銀屑病患者對(duì)PSORS9貢獻(xiàn)率遠(yuǎn)大于成年型銀屑病患者。 第二部分MGST2基因突變篩查及與銀屑病相關(guān)性研究 目的;明確位于PSORS9

4、區(qū)域內(nèi)MGST2基因內(nèi)是否存在與尋常型銀屑病易感性相關(guān)的突變；評(píng)估MGST2基因內(nèi)單核苷酸多態(tài)與尋常型銀屑病易感相關(guān)性。方法在188個(gè)銀屑病家系先證者及48個(gè)正常對(duì)照中，對(duì)MGST2基因的啟動(dòng)子區(qū)域、所有可能的外顯子、外顯子和內(nèi)含子交界區(qū)域測序并進(jìn)行突變檢測及SNP篩查，對(duì)所發(fā)現(xiàn)的突變擴(kuò)大樣本檢測。TMpred軟件對(duì)MGST2蛋白進(jìn)行三維結(jié)構(gòu)預(yù)測；Hploview軟件構(gòu)建基因內(nèi)連鎖不平衡block并挑選TagSNPs；在大樣本銀屑病家系

5、的先證者、散發(fā)病例以及正常對(duì)照中，采用雙向直接測序法對(duì)所選擇的TagSNPs進(jìn)行基因分型，以Phase軟件(2．0．2Version)構(gòu)建單倍型，ETDT(2．0Version)軟件進(jìn)行TDT檢驗(yàn)，對(duì)MGST2基因與尋常型銀屑病易感性進(jìn)行全面的關(guān)聯(lián)分析。 結(jié)論:MGST2在少數(shù)銀屑病患者中可能起著致病作用，但該基因不是銀屑病易感區(qū)域PSORS9內(nèi)的主效易感基因。 第三部分PSORS9區(qū)域內(nèi)銀屑病易感基因IL．15的鑒定

6、 背景:盡管目前在不同人群中已報(bào)道相當(dāng)多的銀屑病易感位點(diǎn)，但其具體發(fā)病機(jī)制尚不清楚。本課題組先前在對(duì)銀屑病精細(xì)定位研究中，已將該易感區(qū)域PSORS9定位到一個(gè)較小的區(qū)域，家系傳遞不平衡檢驗(yàn)在標(biāo)記D4S424附近發(fā)現(xiàn)顯著性相關(guān)證據(jù)，而與該標(biāo)記D4S424相距140kb的IL．15基因是一種可觸發(fā)炎癥細(xì)胞歸巢、血管擴(kuò)張以及對(duì)機(jī)體細(xì)胞免疫平衡狀態(tài)的穩(wěn)定起重要的作用的細(xì)胞因子。無論從功能候選還是位置候選而言，該基因都可以看作是銀屑病的一個(gè)

7、非常重要的候選基因。目的研究IL．15基因與銀屑病易感性之間的相互關(guān)系。 方法:在48個(gè)銀屑病患者及48個(gè)正常對(duì)照中，對(duì)IL。15基因的啟動(dòng)子區(qū)域、外顯子、外顯子和內(nèi)含子交界區(qū)域測序以及部分內(nèi)含子區(qū)域進(jìn)行突變檢測及SNP篩查。以Hploview軟件構(gòu)建LDblock并挑選TagSNPs；采用雙向直接測序法對(duì)所選擇的TagSNPs進(jìn)行基因分型，以Phase軟件(2．0．2Version)構(gòu)建單倍型，對(duì)IL．15基因與尋常型銀屑病易

8、感性進(jìn)行全面的相關(guān)分析；構(gòu)建IL．15基因3’UTR區(qū)域4種不同單倍型重組質(zhì)粒的熒光素酶雙報(bào)告基因載體，轉(zhuǎn)染ECV-304、Jurkat細(xì)胞以及HepG2細(xì)胞，進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)分析，以檢測3'UTR區(qū)域多態(tài)對(duì)基因表達(dá)調(diào)控作用。 結(jié)論:IL·15基因3’UTR區(qū)域的多態(tài)位點(diǎn)g．96516A—T及其周邊一些多態(tài)位點(diǎn)與漢族人群銀屑病的存在顯著相關(guān)性。單倍型HapD(ATAC)是銀屑病易感單倍型。這些遺傳變異可能通過提高IL-15基因的轉(zhuǎn)錄活