一次法咬合重建對(duì)大鼠咬肌組織的影響.pdf

1、牙齒重度磨損（severe occlusal attrition，SOA）是口腔修復(fù)學(xué)中的常見(jiàn)疾病，多見(jiàn)于中老年人，可以導(dǎo)致患者咬合垂直距離（occlusal vertical distance，OVD）降低、髁突移位及肌肉酸痛，還可進(jìn)一步引起顳下頜關(guān)節(jié)紊亂病。治療重度磨損的有效方法為咬合重建，傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為，當(dāng)OVD喪失>4mm時(shí)，需分次緩慢加高OVD，每次加高2～3mm，以免口頜系統(tǒng)出現(xiàn)不適，直至恢復(fù)其正常的OVD。
　　本課題

2、組對(duì)重度磨損且OVD喪失>4mm的患者采用一次法咬合重建后，治療效果滿意，多年隨訪觀察并未發(fā)現(xiàn)咀嚼肌、顳下頜關(guān)節(jié)出現(xiàn)相關(guān)癥狀。為全面探討一次法咬合重建在臨床中的可行性，本課題組前期已成功建立一次法咬合重建動(dòng)物模型，初步研究表明一次法咬合重建后大鼠咬肌、關(guān)節(jié)會(huì)出現(xiàn)可逆性損傷。然而，肌肉損傷及疼痛相關(guān)蛋白在咬肌損傷進(jìn)程中究竟發(fā)生了哪些變化，尚不清楚。
　　目的：
　　本研究依托建立一次法咬合重建大鼠動(dòng)物模型，利用分子生物學(xué)手段觀

3、察分析大鼠一次法咬合重建后咬肌組織結(jié)構(gòu)、肌肉損傷及疼痛相關(guān)蛋白的表達(dá)變化規(guī)律，為一次法咬合重建治療重度磨損的臨床方法提供實(shí)驗(yàn)性理論支持。
　　方法:
　　1.選取成年 SD大鼠，在外科手術(shù)顯微鏡下，逐次降低大鼠上頜后牙高度，建立重度磨損動(dòng)物模型，制取大鼠上頜牙列模型，對(duì)大鼠進(jìn)行取模，口外制作咬合板，利用樹(shù)脂粘接技術(shù)將咬合板粘固在大鼠口內(nèi)建立一次法咬合重建動(dòng)物模型。設(shè)置實(shí)驗(yàn)組、操作對(duì)照組和空白對(duì)照組，根據(jù)不同觀察節(jié)點(diǎn)各組再分為

4、3d、7d、14d、28d四個(gè)亞組。
　　2.通過(guò) HE染色及光鏡、電子顯微鏡觀察，分析一次法咬合重建后大鼠咬肌組織顯微及超微結(jié)構(gòu)的變化。
　　3.應(yīng)用Western blot方法，檢測(cè)一次法咬合重建后不同時(shí)期大鼠咬肌內(nèi)結(jié)蛋白（desmin）及骨骼肌肌鈣蛋白抑制亞基（skeletal muscle troponin I，sTnI）的表達(dá)變化。
　　4.利用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)大鼠血清中肌酸激酶（creatine kinas

5、e，CK）、乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）的活性。
　　5.通過(guò)免疫組化方法，檢測(cè)咬肌組織中P物質(zhì)(substance P，SP)的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1.空白對(duì)照組與操作對(duì)照組大鼠咬肌的顯微及超微結(jié)構(gòu)均未見(jiàn)明顯異常；顯微結(jié)構(gòu)顯示實(shí)驗(yàn)組3d時(shí)大鼠咬肌結(jié)構(gòu)基本正常，7d時(shí)肌纖維間可見(jiàn)少量白細(xì)胞浸潤(rùn)，隨后白細(xì)胞逐漸增多，14d時(shí)肌纖維間白細(xì)胞數(shù)量最多，之后逐漸減少，28d時(shí)恢復(fù)正常

6、。超微結(jié)構(gòu)顯示實(shí)驗(yàn)組3d時(shí)線粒體變形擴(kuò)張，7d時(shí)線粒體明顯腫脹，線粒體嵴模糊或消失，14d時(shí)線粒體輕度腫脹，28d時(shí)線粒體恢復(fù)正常。
　　2.與同期空白對(duì)照組及操作對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組3d時(shí)咬肌內(nèi)desmin和sTnI水平明顯降低（P<0.05），并持續(xù)降低至7d（P<0.01），隨后表達(dá)開(kāi)始增加，28d時(shí)恢復(fù)至對(duì)照組水平（P>0.05）。
　　3.實(shí)驗(yàn)組與同期空白對(duì)照組和操作對(duì)照組相比，血清中CK和LDH含量無(wú)顯著性差異（P

7、>0.05）。
　　4.空白對(duì)照組及操作對(duì)照組咬肌中未見(jiàn)SP陽(yáng)性表達(dá)；實(shí)驗(yàn)組3d時(shí)，可見(jiàn)咬肌肌纖維間有少量SP表達(dá)；7d時(shí)咬肌肌纖維、肌纖維束間可見(jiàn)大量SP陽(yáng)性表達(dá)，神經(jīng)纖維斷面亦可見(jiàn)成簇SP陽(yáng)性表達(dá)；14d時(shí)SP的表達(dá)明顯減少，且僅見(jiàn)于神經(jīng)纖維斷面；28d時(shí)咬肌組織中幾乎沒(méi)有SP的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　1.一次法咬合重建后大鼠咬肌顯微及超微結(jié)構(gòu)都會(huì)發(fā)生一定的損傷性變化，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，咬肌結(jié)構(gòu)逐漸恢復(fù)正常。