重組藍(lán)藻抗病毒蛋白-N抗HSV-1活性的研究.pdf

1、目的: 探討重組藍(lán)藻抗病毒蛋白N抗單純皰疹病毒1型(HSV-1)的作用及可能機(jī)制，為進(jìn)一步開發(fā)該藥提供理論依據(jù)。 方法: 選用HSV-1標(biāo)準(zhǔn)株(SM44株)進(jìn)行了CV-N體內(nèi)及體外病毒活性的研究。體外實(shí)驗(yàn)在Vero細(xì)胞中進(jìn)行，以不同劑量的CV-N作用于HSV-1復(fù)制周期的各個(gè)階段，通過觀察藥物毒性、細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)、MTT比色法檢測細(xì)胞增殖，熒光定量PCR(FQ-PCR)及原位分子雜交，判斷CV-N的細(xì)胞毒性及其抗病毒效果

2、。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)以HSV-1進(jìn)行腦內(nèi)局部接種，制備小鼠皰疹性腦炎模型，觀察CV-N對(duì)感染小鼠的治療作用，以每組小鼠死亡率和平均存活日作為療效指標(biāo)，同時(shí)取腦組織標(biāo)本進(jìn)行HE染色觀察細(xì)胞病變。 結(jié)果: CV-N對(duì)Vero細(xì)胞的增殖無明顯作用，對(duì)Vero細(xì)胞毒性較低，半數(shù)毒性濃度TC50為359μg/ml；CV-N對(duì)HSV-1無直接抑制作用，可干擾HSV-1向Vero細(xì)胞的吸附，但沒有達(dá)到完全抑制；CV-N可有效地抑制病毒的復(fù)制，使感染HS

3、V-1的Vero細(xì)胞存活率明顯提高。FQ-PCR結(jié)果顯示表明隨著CV-N濃度及作用時(shí)間的增加，CV-N對(duì)HSV-DNA的抑制作用明顯增強(qiáng)，具有良好的劑量和時(shí)效關(guān)系。原位雜交結(jié)果表明CV-N作用的HSV-1感染組，其糖蛋白gB mRNA的表達(dá)明顯低于病毒對(duì)照組，隨著作用時(shí)間的增加，其抑制作用明顯增加。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明CV-N可以顯著提高皰疹性腦炎小鼠的存活率，并減輕腦組織的病理改變。 結(jié)論: CV-N抗HSV-1作用機(jī)制與阻滯病毒