慢病毒介導(dǎo)RNA干擾NgR基因?qū)π律笫笕毖跞毖阅X白質(zhì)損傷的修復(fù)作用.pdf

1、目的： 構(gòu)建NgR特異性siRNA慢病毒重組體，在新生大鼠缺氧缺血性腦白質(zhì)損傷模型水平，探討NgR特異性siRNA慢病毒重組體干擾大鼠NgR mRNA表達(dá)及其對(duì)新生大鼠缺氧缺血性腦白質(zhì)損傷的修復(fù)作用。 方法： 1、建立P3新生SD大鼠缺氧缺血性腦白質(zhì)損傷模型，從生物行為學(xué)、組織形態(tài)學(xué)進(jìn)行驗(yàn)證。 2、設(shè)計(jì)、構(gòu)建NgR特異性siRNA慢病毒重組體并鑒定。 3、Western Blot方法外源篩靶、內(nèi)源

2、篩靶，選擇最有效的靶點(diǎn)，并包裝成慢病毒。 4、40只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、空病毒組、慢病毒組(每組10只)，新生大鼠缺氧缺血性腦白質(zhì)損傷3天后(P6)經(jīng)側(cè)腦室注射給藥，觀察大鼠的行為學(xué)改變。 5、80只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、空病毒組、慢病毒組(每組20只)，新生大鼠缺氧缺血性腦白質(zhì)損傷3天后(P6)經(jīng)側(cè)腦室注射給藥，RT-PCR檢測(cè)P6、P7、P9、P13 SD大鼠NgR mRNA表達(dá)情況。

3、 結(jié)果： 1、結(jié)扎P3新生SD大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈建立缺氧缺血性腦白質(zhì)損傷模型，從生物行為學(xué)、組織形態(tài)學(xué)進(jìn)行驗(yàn)證，模型組都出現(xiàn)了有意義的改變。 2、設(shè)計(jì)、構(gòu)建NgR特異性siRNA慢病毒重組體經(jīng)PCR鑒定、基因測(cè)序儀測(cè)序，結(jié)果與設(shè)計(jì)序列相符，目的基因序列準(zhǔn)確無(wú)誤，慢病毒重組體構(gòu)建成功。 3、篩選最有效的靶點(diǎn)，包裝成慢病毒，慢病毒重組體濃度為：E+9TU/ml。 4、模型組、空病毒組和慢病毒組大鼠的行為學(xué)相對(duì)

4、于假手術(shù)組出現(xiàn)明顯改變，慢病毒組大鼠恢復(fù)情況明顯好于模型組和空慢病毒組。 5、模型組和空病毒組大鼠的NgR mRNA表達(dá)量相對(duì)于假手術(shù)組明顯增高，慢病毒組NgR mRNA表達(dá)比假手術(shù)組增加，但明顯少于模型組和空慢病毒組。 結(jié)論： 本研究采用結(jié)扎P3新生SD大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈建立缺氧缺血性腦白質(zhì)損傷模型，為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)提供了可靠的動(dòng)物模型：設(shè)計(jì)、構(gòu)建NgR特異性siRNA慢病毒重組體并將其應(yīng)用到動(dòng)物模型，在活體動(dòng)物水平