利迪鏈菌素L-玫紅糖合成基因的克隆與功能分析.pdf

1、利迪鏈菌素是由利迪鏈霉菌產(chǎn)生的脂鯉酸類抗生素，具有抑制細(xì)菌RNA合成的活性。利迪鏈菌素在其生物合成的后期被L-玫紅糖糖基化。L-玫紅糖是6-脫氧己糖家族中的一種2,3,6-三脫氧糖。和所有的6-脫氧己糖家族成員一樣，L-玫紅糖生物合成的前兩步為由葡萄糖形成NDP-D-葡萄糖，再發(fā)生一步脫水反應(yīng)，形成NDP-4-酮-6-脫氧-D-葡萄糖。這兩步反應(yīng)是分別由NDP-己糖合成酶及NDP-D-葡萄糖-4,6脫水酶催化的。 本文比較了已知

2、的五種抗生素中L-玫紅糖NDP-D-葡萄糖-4,6脫水酶編碼基因，設(shè)計(jì)引物，在對(duì)PCR反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化的基礎(chǔ)上，獲得了長(zhǎng)度為724bp的基因片斷Lidl。數(shù)據(jù)庫(kù)檢索結(jié)果顯示它與NDP-D-葡萄糖-4,6脫水酶編碼基因同源性很高。 在比較五種抗生素中L-玫紅糖的生物合成基因簇結(jié)構(gòu)后發(fā)現(xiàn)，NDP-己糖合成酶編碼基因都位于NDP-D-葡萄糖-4,6脫水酶編碼基因的上游，在其中四種抗生素中，它們的位置相鄰。在設(shè)計(jì)適當(dāng)?shù)囊镞M(jìn)行PCR擴(kuò)增

3、后得到一段長(zhǎng)度為1234bp的基因片斷Lid2。數(shù)據(jù)庫(kù)檢索結(jié)果表明該片斷的前500bp與NDP-己糖合成酶編碼基因有很高的同源性。而后724bp片段則與基因片段Lidl一致。將這兩個(gè)基因命名為lidY及l(fā)idH。生物信息學(xué)分析表明，這兩個(gè)基因分別編碼NDP-D-葡萄糖-4,6脫水酶和NDP-己糖合成酶。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在利迪鏈菌素的生物合成基因簇中，NDP-己糖合成酶編碼基因位于NDP-D-葡萄糖-4,6脫水酶編碼基因上游且位置相臨。