牛奶中四環(huán)素類藥物多殘留RP-HPLC檢測(cè)方法的建立.pdf

1、本試驗(yàn)旨在通過(guò)對(duì)四環(huán)素類藥物色譜分離條件的優(yōu)化與篩選，分析不同洗脫模式對(duì)四環(huán)素類藥物分離的影響；采用梯度洗脫模式和固相萃取等技術(shù)，建立了能同時(shí)檢測(cè)牛奶樣品中二甲胺四環(huán)素、四環(huán)素、金霉素、土霉素、多西環(huán)素、去甲基金霉素、甲烯土霉素7種抗生素殘留量的反相高效液相色譜方法。 1．四環(huán)素類藥物色譜分離條件的篩選和優(yōu)化在色譜分離條件的建立中，結(jié)合7種四環(huán)素類藥物理化性質(zhì)和結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，分析了影響四環(huán)素類藥物分離因素；經(jīng)過(guò)對(duì)流動(dòng)相緩沖液濃度、配

2、比、酸度、流速以及檢測(cè)波長(zhǎng)的多次試驗(yàn)優(yōu)化和改進(jìn)現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中測(cè)定四環(huán)素類藥物的洗脫方式，最終篩選和建立了采用SunfireTM C18(250 mm×4.6mm，5 μm)柱為色譜柱，以甲醇-乙腈-0.01 mol/L草酸為流動(dòng)相，流速為10ml/min和檢測(cè)波長(zhǎng)為355nm的快速分離7種四環(huán)素類藥物的色譜條件。 2．梯度洗脫模式的構(gòu)建及其影響因子的分析通過(guò)對(duì)四環(huán)素類藥物的梯度洗脫條件及其影響因素的系統(tǒng)分析，結(jié)果表明，在梯度洗脫

3、模式下，洗脫時(shí)間與分離度成正相關(guān)；梯度陡度與分離度成負(fù)相關(guān)；改變有機(jī)相濃度變化范圍和梯度洗脫程序曲線形狀可以獲得最佳的分離效果。建立了可使二甲胺四環(huán)素等7種四環(huán)素類藥物達(dá)到基線分離的最佳梯度洗脫條件。 3．利用固相萃取技術(shù)檢測(cè)牛奶中7種四環(huán)素類藥物殘留本實(shí)驗(yàn)采用固相萃取技術(shù)，分析和探討了影響牛奶樣品中7種四環(huán)素類藥物殘留的提取、凈化和濃縮等過(guò)程的主要因素。建立了以pH為4的Mellvaine-EDTA-三氯乙酸緩沖液為提取液的工

4、藝流程；確定了以30％的甲醇水溶液為淋洗試劑(淋洗體積為8mL)、以甲醇-乙酸乙酯溶液作為洗脫液(洗脫速率為1.0mL/min)的HLB固相萃取柱凈化的最佳條件。通過(guò)前處理方法的得到的7種四環(huán)素類抗生素的線性范圍寬，峰面積和樣品濃度在0.02～1.0μg/mL呈良好的線性關(guān)系，加標(biāo)平均回收率在78.66％～106％，最低檢測(cè)限為0.02μg/mL。 分析評(píng)價(jià)結(jié)果表明，該方法操作簡(jiǎn)單、重現(xiàn)性好、檢測(cè)限低、靈敏可靠，并顯著降低了分析