四環(huán)素酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的研究.pdf

1、本論文對(duì)檢測(cè)動(dòng)物源性食品中四環(huán)素殘留的間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。
　　采用甲醛法將四環(huán)素與鑰孔血藍(lán)蛋白偶聯(lián)制備人工免疫原。通過免疫新西蘭大白兔得到抗血清，使用ProteinASepharose-4B親和層析法純化血清得到高效價(jià)和高特異性的抗四環(huán)素多克隆抗體。采用甲醛法將四環(huán)素與卵血清白蛋白連接制備包被原，建立了間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法，對(duì)影響實(shí)驗(yàn)的各因素（包被量，抗體稀釋度，抗體稀釋液等）進(jìn)行了優(yōu)化與研究，最終確定

2、包被量為0.05μg/孔，抗體稀釋度為1∶10000，抗體稀釋液為0.1％BSA/PBS，封閉液為0.5％乳粉/PBS溶液時(shí)所獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線靈敏度最高，穩(wěn)定性最好。本實(shí)驗(yàn)所建立方法的靈敏度(IC50)為0.33±0.09μg/L，最低檢出限(IC15)為0.01±0.004μg/L。本實(shí)驗(yàn)所制備的抗體具有良好的特異性，與兩種結(jié)構(gòu)類似物土霉素、金霉素交叉反應(yīng)率分別為0.39％和4.42％，與其他常用獸藥青霉素、鏈霉素、氯霉素均無交叉反應(yīng)。

3、
　　選擇牛奶、蜂蜜、豬肉、牛肉、雞肉、魷魚、大眼鯛魚、比目魚、蝦作為樣品進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)，牛奶添加回收率為85.88％-109.17％，蜂蜜添加回收率為94.52％-107.59％，豬肉添加回收率為84.19％-98.96％，牛肉添加回收率為75.91％-105.58％，雞肉添加回收率為84.40％-109.64％，魷魚添加回收率為73.08％-115.44％，大眼鯛魚添加回收率為67.45％-104.76％，比目魚添加回收率為

4、74.55％-112.46％，蝦添加回收率為82.84％-111.85％。本實(shí)驗(yàn)所建立的方法在牛奶、魷魚中檢出限為5μg/kg，蜂蜜、豬肉、牛肉、雞肉、大眼鯛魚、比目魚、蝦檢出限為10μg/kg，板內(nèi)變異和板間變異均小于20％。使用國(guó)外試劑盒驗(yàn)證本實(shí)驗(yàn)建立的四環(huán)素間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫法，兩種方法的檢測(cè)結(jié)果一致性很高，其線性回歸方程為:y=0.8542x+2.2848，線性相關(guān)系數(shù)R2=0.9954。說明本研究建立的方法具有很好的準(zhǔn)確性和精密