牛體外受精卵體外發(fā)育影響因素的研究.pdf

1、本研究的目的是在己有的基礎(chǔ)上對牛卵母細(xì)胞體外成熟、體外受精及早期胚胎體外發(fā)育作進(jìn)一步研究，重點(diǎn)進(jìn)行了血清的添加濃度和牛胎兒睪丸支持細(xì)胞(Sertoli cells，SCs)對牛體外受精卵體外發(fā)育的影響的研究。旨在提高牛體外受精卵的卵裂率和囊胚發(fā)育率。本試驗(yàn)從以下幾個(gè)方面進(jìn)行研究： 1.為了探討在牛受精卵培養(yǎng)液中添加血清替代品對體外受精卵發(fā)育的影響，確定血清在合成輸卵管液(Synthetic oviduct fluid，SOF)中

2、合適的添加濃度及添加時(shí)期，以篩選優(yōu)良的牛體外受精卵體外培養(yǎng)體系。在SOF液中分別添加10％新生牛血清(Newborn bovine serum，NBS)、8 g/L牛血清白蛋白(Bovine serum albumin，BSA)和1 g/L聚乙烯醇(Polyvinyl alcohol，PVA)進(jìn)行牛體外受精卵的全程培養(yǎng)。結(jié)果顯示，SOF培養(yǎng)液中添加PVA，BSA替代血清時(shí)卵裂率和囊胚發(fā)育率都明顯下降，說明PVA或BSA不能達(dá)到血清的效果

3、。在受精卵培養(yǎng)的最初48 h用5％NBS，之后用10％NBS培養(yǎng)液時(shí)，卵裂率(66.3％)和囊胚發(fā)育率(30.9％)與SOF+10％NBS全程培養(yǎng)組(58.7％，29.3％)差異不顯著(P>0.05)。說明體外培養(yǎng)時(shí)在SOF培養(yǎng)液中添加一定濃度的血清以及改變血清的添加方式，不會影響牛體外受精卵體外發(fā)育效果。比較發(fā)情第7天的母牛血清(7<'th>day oestrus COW serum，OCS)與NBS的效果，結(jié)果SOF+10％NBS組

4、與SOF+10％OCS組的卵裂率、囊胚率差異不顯著，發(fā)情牛血清可替代NBS用于牛早期胚胎的體外培養(yǎng)。 2.研究體外不同階段牛胎兒睪丸SCs對牛受精卵體外發(fā)育的影響。從屠宰場采集5～7月齡牛胎兒睪丸，經(jīng)原代和傳代培養(yǎng)制備牛胎兒睪丸SCs單層，對比原代與傳代胎牛睪丸SCs飼養(yǎng)層與牛體外受精卵共培養(yǎng)時(shí)受精卵的發(fā)育情況；分別以4×10<'4>/mL與2×10<'4>/mL兩個(gè)密度接種傳代胎牛睪丸支持細(xì)胞與牛受精卵共培養(yǎng)，并設(shè)對照組。牛體

5、外受精卵與傳代牛胎兒睪丸SCs共培養(yǎng)組，卵裂率(79.3％)高于原代SCs組(69.2％)，差異不顯著(P>0.05)；囊胚發(fā)育率(41.3％)極顯著高于原代SCs組(16.7％)(P<0.01)。傳代2.0×10<'4>/mL密度SCs共培養(yǎng)組卵裂率與傳代4.0×10<'4>/mL密度SCs共培養(yǎng)組的卵裂率差異不顯著，胚胎發(fā)育率隨著飼養(yǎng)層的密度增大明顯下降。 結(jié)論為，傳代牛胎兒睪丸SCs制備的飼養(yǎng)層能有效促進(jìn)牛體外受精卵的體外