牛卵母細胞體外成熟與體外受精技術(shù)的研究.pdf

1、本研究在總結(jié)前人研究的基礎(chǔ)上，結(jié)合實驗室自身條件，從牛卵母細胞的采取、代血清體外成熟培養(yǎng)、精子篩選、外源ATP促進受精精子活力等方面對牛卵母細胞體外培養(yǎng)技術(shù)、精子獲能、體外受精及早期胚胎體外發(fā)育作了進一步研究，目的在于優(yōu)化體外胚胎生產(chǎn)體系，探索胚胎工程技術(shù)環(huán)節(jié)中的改進方法，為理論研究積累經(jīng)驗，為生產(chǎn)實踐提供技術(shù)支持。 首先對不同采卵方法的效率進行了調(diào)查，結(jié)果表明，在三種采卵方法中，抽吸法效率較高，可快速采得發(fā)育較好的卵母細胞，但

2、易造成卵巢內(nèi)部卵子的露采；切割法卵子回收數(shù)量較多；抽吸加切割法不僅回收數(shù)量多，而且可以將不同質(zhì)量的卵子分離，但其操作較為繁瑣。抽吸法和切割法適用于卵巢來源充足的情況下，抽吸加切割法適合于在卵巢來源有限時使用。 在牛卵母細胞體外成熟培養(yǎng)過程中，本研究在同一種成熟培養(yǎng)液中，分別添加用0.3﹪PVP和10﹪FBS，檢驗PVP代血清培養(yǎng)是否可行。結(jié)果顯示，0.3﹪PVP處理組與10﹪FBS組卵母細胞的成熟率分別為70.08﹪和79.75

3、﹪，二者差異不顯著(P＞0.05)。代血清培養(yǎng)的受精率與有血清培養(yǎng)的受精率(50.78﹪和49.19﹪)及桑囊率(22.45﹪和20.88﹪)差異并不顯著(P＞0.05)。這表明PVP代替血清進行牛卵母細胞體外成熟培養(yǎng)是可行的，但是仍有待于進一步完善和加強。 精子的篩選是體外受精過程中的重要步驟之一。本研究將兩種常用的精子篩選方法，即Swim-up法與Percoll法，進行了篩選效果對比。結(jié)果顯示，用Swim-up和Percol

4、l法處理牛冷凍精液后，牛卵母細胞受精率分別為52.14﹪和54.29﹪，二者無顯著差異(P＞0.05)。Percoll法更加簡便、快速，應(yīng)是今后應(yīng)用的首選方法。 最后，采用ATP對解凍精液進行處理與添加同體積0.9﹪NaCl處理精液受精組對比，探討了適當(dāng)濃度外源ATP處理牛精子對精子活力和受精率是否有提高和促進作用。結(jié)果顯示，添加ATP處理組的精卵受精率(55.74﹪)高于添加同體積0.9﹪NaCl處理組的受精率(51.29﹪)