耐冷相關(guān)基因?qū)υ缇镜倪z傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、水稻是世界上最重要的糧食作物之一，它為人類提供了三分之一以上的食物和能量。然而，水稻在芽期、苗期、孕穗期和抽穗期都是低溫敏感期，低溫對(duì)其生長和產(chǎn)量都有較大的影響。每年由于低溫冷害，全世界大約損失30～50億kg 稻谷。因此，改造水稻的耐冷性狀，增強(qiáng)水稻的耐冷能力，降低由于低溫冷害造成的水稻減產(chǎn)，具有十分重要的意義。 CBF/DREB(C-repeat/DRE Binding Factor)轉(zhuǎn)錄因子是近年來人們?cè)谘芯恐参锟狗巧锩{

2、迫時(shí)廣泛關(guān)注的一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子家族，AtCS是提交于Genebank中的擬南芥耐冷相關(guān)基因。本研究使用的BrDREB轉(zhuǎn)錄因子是根據(jù)擬南芥CBF轉(zhuǎn)錄因子的保守序列設(shè)計(jì)簡并引物，利用RACE(Rapid Aplication of cDNA Ends)方法從大白菜中克隆出來的。BnCS是根據(jù)己報(bào)道的擬南芥AtCS全序列，設(shè)計(jì)簡并引物，同樣利用RACE方法從甘藍(lán)型油菜滬油15中分離的。 為了將耐冷相關(guān)基因BnCS基因和BrDREB基因?qū)?/p>

3、早粳稻水稻品種中，豐富黑龍江水稻耐冷基因資源，創(chuàng)造寒地耐冷轉(zhuǎn)基因水稻材料，鞏固和發(fā)展黑龍江水稻生產(chǎn)，本研究篩選了適合水稻遺傳轉(zhuǎn)化的黑龍江水稻品種，優(yōu)化了早粳稻組織培養(yǎng)體系及農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化體系主要技術(shù)關(guān)鍵點(diǎn)，獲得了轉(zhuǎn)BnCS基因和BrDREB基因的水稻植株并進(jìn)行了外源基因整合鑒定。具體研究結(jié)果如下： 1．適合于遺傳轉(zhuǎn)化的品種有合江19、普優(yōu)17、龍粳14和龍育390等； 2．優(yōu)化的早粳稻組織培養(yǎng)及遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)點(diǎn)包括：①

4、使用NMB(N6大量元素、MS微量元素和B5有機(jī)成分)作為基本培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)，MS培養(yǎng)基作為分化培養(yǎng)基；②誘導(dǎo)培養(yǎng)1周后，去掉胚芽；③分化培養(yǎng)之前在繼代培養(yǎng)基中添加5mg/L ABA進(jìn)行預(yù)分化培養(yǎng)；④篩選培養(yǎng)基G418濃度200mg/L，或PPT、濃度2.5mg/L；⑤農(nóng)桿菌培養(yǎng)至OD<,600>=0.6左右，用侵染培養(yǎng)液稀釋4～5倍制成侵染液。⑥農(nóng)桿菌侵染液和共培養(yǎng)培養(yǎng)基均添加200μmol/L AS；⑦通用清菌方法處理