矮牽牛重瓣基因的初步定位及相關基因功能分析.pdf

1、重瓣性狀是觀賞植物最重要的觀賞性狀之一，對此分子機理的研究可很大程度上改善植物的花型，使其更具有觀賞性?，F階段的研究集中于花特征基因如何決定花器官形成，也可從分子標記方面著手定位相關基因。矮牽牛作為模式植物，研究其重瓣性狀則具有更大的意義。
　　結合前人對矮牽?；òl(fā)育過程的分析，可以推測重瓣形成發(fā)生在花發(fā)育早期階段，新的重瓣基因在花芽分化時期起作用，從而調控花原基數量，本研究以此為切入點，以期發(fā)掘與重瓣性狀相關的基因。以遺傳背景相

2、近的單重瓣矮牽牛為材料，采用圖位克隆的方法克隆矮牽牛重瓣相關基因。前期已用SRAP的分子標記、ISSR標記篩選后已在其附近找到了一個與重瓣性狀緊密連鎖的標記，比對持續(xù)更新的矮牽牛基因組測序文庫后，獲得其側翼延長序列共2184468bp，現獲得結果如下：
　　1、本研究主要是在在此序列兩端設計特異引物，利用特異序列標記引物進行多態(tài)性分析，結合BSA標記在1150株單重瓣分離群體中篩選驗證與重瓣性狀緊密連鎖的標記。通過初篩和后期結合B

3、SA方法篩選，現已找到8個與重瓣緊密連鎖的標記，結合前期得到的9個，均只在重瓣中擴增出條帶。用1150株群體對其中部分做重組率分析，均無交換單株，與重瓣性狀共分離。
　　2、結合上述先后得到的17個標記可將與重瓣相關基因定位至1400kb-2100kb之間，對此區(qū)段的轉錄組結果進行分析，獲得在單重瓣內表達發(fā)生差異的區(qū)段，從此區(qū)段的序列特征分析：擴增此片段，比對單瓣和重瓣矮牽牛中片段的差異，發(fā)現在單瓣中單個堿基發(fā)生了部分突變，其余未

4、有太大差異；而重瓣序列與數據庫中的原始序列完全一致。
　　3、由于在單瓣和重瓣中，片段產生了單堿基突變，故對此片段的功能進行分析：針對單瓣中堿基發(fā)生突變的片段用Gateway技術構建RNAi干涉載體，轉化單瓣矮牽牛W115和野生煙草，分別獲得四棵轉基因矮牽牛和二十一棵煙草，其中煙草還未開花無法觀測表型。矮牽牛未發(fā)現與花發(fā)育相關的性狀產生。
　　根據上述結果得出通過分子標記技術結合轉錄組初步分析獲得的片段對單瓣矮牽牛在花器官表