IVIg與HLA-E單克隆抗體TFL007抑制HLA抗體分泌的研究.pdf

1、靜脈注射免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin，IVIg)是腎移植術前高敏狀態(tài)患者脫敏療法的主要藥物之一，同時也應用于治療腎移植術后抗體介導的排斥反應，但其拮抗白細胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)抗體的機制目前尚不清楚。加之IVIg治療相當昂貴，常受限于血漿來源短缺而臨床供應不足，且往往因不同批號而表現不同的作用效果。因此，深入研究IVIg相關機制，最終生產出可充足供應臨床的、效

2、果穩(wěn)定的、價格低廉的替代品是腎移植領域亟待解決的問題。
　　本論文從IVIg與HLA-E抗體的關系入手，從一個全新的視角對IVIg在腎移植臨床應用的有效性做了合理推斷，并利用體外細胞培養(yǎng)體系證實了HLA-E單克隆抗體較IVIg有更好的抑制HLA抗體分泌的作用。論文的第一部分驗證了IVIg和HLA-E抗體之間的關系。我們發(fā)現，多種目前臨床上應用的IVIg中均檢測到能與HLA Ia(A/B/Cw)類和Ib(E/F/G)類抗原結合的物質

3、，且HLA Ib類抗原結合的滴度水平很高，提示IVIg中含有HLA抗體。進一步我們吸附清除了IVIg中可能含有的HLA-E抗體，結果顯示IVIg之前所表現出的能與多種HLAⅠ類抗原結合的特征也隨之消失，這就表明IVIg中含有HLA-E抗體。而之前我們實驗室已經發(fā)現HLA-E抗體可以與HLA Ia類抗原起交叉結合反應。這一發(fā)現就促使我們思考，既然HLA-E抗體可以模擬IVIg對HLA抗原的結合特征，那么它能否同樣具有抑制HLA抗體分泌的能

4、力呢？
　　為了驗證我們的假說，在論文的第二部分內容中，我們建立了誘導外周血B細胞激活后分泌HLA抗體的體系。我們抽取外周血的健康志愿者，是一位因23年前妊娠導致同種異體HLA抗原致敏的女性。在缺乏致敏HLA抗原刺激的條件下，其外周血中的特異性同種異體HLAⅡ類抗體在持續(xù)存在了23年之后仍表現出較高的滴度水平，這提示其外周血中有特殊的長壽記憶性B細胞的存在。我們比較了兩種激活純化B細胞的方案，根據兩套方案對漿細胞比例增加的統計學差

5、異及對HLA抗體分泌的趨勢差異，在后續(xù)的干預實驗中選取了有白介素4參與的激活方案。
　　在論文的第三部分內容中，我們利用在第二部分建立的誘導體外B細胞激活分泌HLAⅡ類抗體的體系，比較了IVIg和HLA-E單克隆抗體TFL007對同種異體HLA抗體分泌的抑制效果。我們發(fā)現，IVIg僅能抑制原發(fā)性同種異體HLA DRB1*0101抗體的分泌，但沒有對繼發(fā)性同種異體HLA DRB1*0102抗體產生有統計學差異的抑制作用。更重要的是，

6、其它4種繼發(fā)性同種異體HLA抗體在經過IVIg干預處理之后，滴度水平較培養(yǎng)基對照組有統計學意義上的升高。而HLA-E單克隆抗體TFL007則表現出對所有分泌的HLAⅡ類抗體一致的抑制效果，且即使對原發(fā)性同種異體HLADRB1*0101抗體分泌的抑制強度也大于IVIg。我們隨后又利用從日本北海道紅十字會血液中心獲得的具有HLAⅠ類抗體分泌能力的永生化B細胞做了補充驗證，該永生化B細胞來源于另一位因多次妊娠而產生HLAⅠ類抗體的女性健康志愿

7、者。結果顯示兩種不同制劑的IVIg均沒有統計學證據表明具有抑制HLAⅠ類抗體分泌的效果，而HLA-E單克隆抗體TFL007表現出了明顯的抑制HLAⅠ類抗體分泌的作用，且此抑制作用具有劑量效應關系，高濃度的TFL007表現出的抑制作用最強，隨著濃度降低，抑制效果也隨之減弱。
　　本論文通過研究IVIg與HLA-E抗體的關系，從一個全新的視角對IVIg在腎移植臨床應用的有效性做了合理推斷，并利用體外細胞培養(yǎng)體系證實了HLA-E單克隆抗