基于單克隆抗體的氯霉素ELISA研究.pdf

1、本論文制備了一種能夠識別獸藥氯霉素的單克隆抗體，并建立了一種用于檢測海產(chǎn)品中氯霉素殘留的酶聯(lián)免疫方法。本論文還制備了能夠識別卵類黏蛋白的單克隆抗體。
　　利用活化酯反應(yīng)將經(jīng)化學(xué)合成反應(yīng)制得的氯霉素半抗原連接到載體蛋白KLH上，形成氯霉素人工抗原，并免疫小鼠。取小鼠脾臟與SP2/0骨髓瘤細胞進行細胞融合，經(jīng)過細胞篩選、細胞克隆獲得了一株能夠穩(wěn)定分泌抗氯霉素單克隆抗體的細胞株10A3B6E。經(jīng)小鼠體內(nèi)培養(yǎng)制備腹水并經(jīng)純化得到單克隆抗體

2、。利用亞型鑒定試劑盒進行鑒定，得到抗體的重鏈亞型為IgG1，輕鏈亞型為Kappa。通過對免疫分析方法工作條件的優(yōu)化，建立了一種簡便、快捷、實用的氯霉素直接競爭ELISA方法。單克隆抗體包被量為0.02μg/孔;封閉液為0.5％脫脂乳粉;樣品稀釋液為0.05 mol/L、pH5.7的PBS;該直接競爭ELISA方法IC50值為0.54±0.04 ng/mL、IC15值為0.10±0.03ng/mL。與3種氯霉素結(jié)構(gòu)類似物和2種其它獸藥的交