大豆異黃酮在中國(guó)人體內(nèi)的初步代謝動(dòng)力學(xué)探討.pdf

1、大豆是中國(guó)傳統(tǒng)的營(yíng)養(yǎng)豐富、栽種廣泛的農(nóng)作物，我國(guó)已有千年的種植食用和民間傳承烹飪和釀制大豆及其制品的記錄和史料。大豆中的成份--大豆異黃酮，作為一種典型植物性雌激素，同時(shí)兼有其他活性作用，受到國(guó)內(nèi)外廣泛的研究。目前人們已從大豆中己發(fā)現(xiàn)并分離出12種異黃酮化合物。其中有3種糖苷配基：大豆黃素(Daidzein)、染料木素(Genistein)和黃豆黃素(Glycitein)：9種對(duì)應(yīng)的異黃酮糖苷(即葡萄糖苷、丙二?；擒蘸鸵阴；禽?。大

2、豆中的異黃酮糖苷約占總異黃酮的98％，大豆中大部分糖苷在進(jìn)入體內(nèi)后被水解，以在結(jié)腸細(xì)菌作用下水解β-糖苷鍵為主要形式，脫去糖基轉(zhuǎn)變?yōu)橛坞x苷元才可以被胃腸粘膜吸收。只有少部分的游離苷元可以被直接吸收，大豆異黃酮糖苷和苷元在體內(nèi)代謝過(guò)程比較復(fù)雜，迄今為止未得以完全闡明[1]。雌馬酚(Equol)作為大豆黃素(Daidzein)的體內(nèi)活性代謝產(chǎn)物，優(yōu)于前體的生物活性以及個(gè)體對(duì)于雌馬酚的轉(zhuǎn)化現(xiàn)象一直吸引總多研究者的視線。目前國(guó)外有文獻(xiàn)報(bào)道歐美的

3、白種人[2-3]，亞洲的日本人[4]、泰國(guó)人[5]的大豆異黃酮一些人體代謝數(shù)據(jù)，但在中國(guó)人群中的大豆異黃酮代謝情況如何，這正是本試驗(yàn)想要探討的目的。本研究共分兩個(gè)部分： 第一部分：建立一種靈敏、特異和準(zhǔn)確的，可以同時(shí)定量測(cè)定機(jī)體的尿液和血漿中6種大豆異黃酮化合物和活性代謝產(chǎn)物雌馬酚的HPLC-MS/MS法。在本方法中，所測(cè)定的血漿和尿液中六種大豆異黃酮糖苷和對(duì)應(yīng)苷元(Daidzin，Daidzein，Genistin，Genis

4、tein，Glycitin，Glycitein)的最低定量限(LLOQ)分別為血漿中：0.481pmol·mL-1、0.787pmol·mL-1、0.463pmol·mL-1、0.741pmol·mL-1、0.448pmol·mL-1和0.704pmol·mL-1；尿液中：4.81pmol.mL-1、7.87pmol·mL-1、4.63pmol·mL-1、7.41pmol·mL-1、4.48pm01.mL-1、7.04pmol·mL-1

5、和雌馬酚0.826pmol·mL-1。其相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍：六種大豆異黃酮化合物(Daidzin，Daidziein，Genistin，Genistein，Glycitin，Glycitein)依次在血漿中，0.481～1202pmol·mL-1、0.787～1969pmol·mL-1、0.463～1157pmol·mL-1、0.741～1852pmol·mL-1、0.448～1121pmol·mL-1、0.704～1761pmol·m

6、L-1；在尿液中依次是4.81～1202pmol·mL-1、7.87～1969pmol·mL-1、4.63～1157pmol·mL-1、7.41～1852pmol·mL-1、4.48～1121pmol·mL-1、7.04～1761pmol·mL-1；雌馬酚在尿液中的定量范圍在2.07～2066pmol·mL-1。 本文在特異性、線性、靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度、回收率、穩(wěn)定性七個(gè)方面對(duì)這一方法進(jìn)行了嚴(yán)格的方法學(xué)評(píng)價(jià)。評(píng)價(jià)結(jié)果：各待測(cè)

7、物的日內(nèi)和日間準(zhǔn)確度均在85～115％之間，日內(nèi)和日間的精密度均在15％以內(nèi)；在標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度范圍內(nèi)以直線擬合，線性良好，r均大于0.995。游離六種大豆異黃酮糖苷和對(duì)應(yīng)苷元的濃度及其中一種活性較強(qiáng)的代謝產(chǎn)物雌馬酚(Equol)的最低定性(LimitofDetection，LOD)的S/N均大于3。血漿中6個(gè)測(cè)定化合物(Daidzin、Daidzein、Genistin、Genistein、Glycitin、Glycitein)的絕對(duì)回

8、收率在低、中、高三個(gè)濃度水平一致，其平均值分別為74.2、67.4、71.8、85.8、62.7和67.7；尿液中7個(gè)測(cè)定化合物(Daidzin、Daidzein、Genistin、Genistein、Glycitin、Glycitein和equol)的萃取回收率在低、中、高三個(gè)濃度水平一致，其平均值分別為66.8、68.2、67.6、59.3、53.3、66.2和79.3。穩(wěn)定性結(jié)果證實(shí)，樣品室溫(25℃)放置20h，萃取后樣品自動(dòng)進(jìn)

9、樣器(10℃)放置12h后化合物穩(wěn)定。這些方法學(xué)考核結(jié)果均證實(shí)了本方法的特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速準(zhǔn)確和操作簡(jiǎn)便，是可靠穩(wěn)定的人體血漿和尿液的定量方法，能夠滿足本研究的的需要。 第二部分：在此定量方法基礎(chǔ)上，本研究對(duì)于13名年齡在25-52歲(9女4男)，生活在北京地區(qū)的健康居民志愿者進(jìn)行了單劑代謝動(dòng)力學(xué)研究。試驗(yàn)采用了隨機(jī)、開(kāi)放的試驗(yàn)設(shè)計(jì)，通過(guò)測(cè)定給予單次口服含總大豆異黃酮(SIFs)162.9mg[6]保健品膠囊后，不同時(shí)間的

10、血漿和尿液中的游離大豆黃苷(Daidzin)、大豆黃素(Daidzein)、染料木苷(Genistin)、染料木素(Genistein)、黃豆黃苷(Glycitin)、黃豆黃素(Glycitein)和尿液中的雌馬酚(Equol)的濃度。分析13名健康成年人血漿藥物代謝動(dòng)力學(xué)的數(shù)據(jù)和尿藥排泄率，并使用非房室模型進(jìn)行了分析比較。試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在單次給予大豆異黃酮的情況下，志愿者對(duì)于的大豆異黃酮的吸收較快，個(gè)體差異較大，得到的血漿中的6個(gè)大豆

11、異黃酮化合物Daidzin、Daidzein、Genistin、Genitein、Glycitin和Glycitein的Tmax*分別為：1.0(0.5，6.0)h、6.0(0.5，8.0)h、7.5(1.0，36)h、5.0(0.5，10)h、5.0(0.5，24)h和7.0(4.0，10)h；Cmax分別為：4.13±2.26ng·mL-1、24.5±27.0ng·mL-1、1.05±1.28ng·mL-1、3.56±3.00ng·

12、mL-1、0.290±0.459ng·mL-1、19.3±19.0ng·mL-1；AUC0-t分別為：9.4±4.0h·ng·mL-1、66.1±44.2h·ng·mL-1、5.3±6.1h·ng·mL-1、9.0±6.7h·ng·mL-1、0.91±1.71h·ng·mL-1和57.8±33.7h·ng·mL-1；MRT0-t分別：3.1±1.1h、6.0±1.6h、8.0±9.5h、5.2±2.4h、6.8±5.3h和7.4±1.8

13、h。6種大豆異黃酮研究數(shù)據(jù)顯示，體內(nèi)代謝以苷元形式更占優(yōu)勢(shì)，糖苷排泄比苷元快，清除時(shí)間基本比苷元提前，血漿中糖苷與苷元均在24h內(nèi)從體內(nèi)排出完畢；尿液累積排泄量在48h基本完成。通過(guò)對(duì)尿液中代謝產(chǎn)物雌馬酚(Equol)的測(cè)定發(fā)現(xiàn)：非雌馬酚生成者占23％，與雌馬酚生成者比較，兩者代謝前體Daidzin和Daidzein的尿種中累積排泄率無(wú)顯著性差異，其累積排泄始于給藥后4h，60h基本完成。6個(gè)大豆異黃酮化合物和雌馬酚的尿液累積排泄率不受