抗人B7-2單鏈抗體基因的構(gòu)建及表達研究.pdf

1、鼠源性單抗在人體使用后可產(chǎn)生人抗鼠抗體（Human Anti—Mouse Antibody，HAMA）反應，而且分子量大，不能有效進入病灶部位，臨床使用受到限制。單鏈抗體（single chain antibody，ScFv）是由一條連接肽將IgG分子重鏈和輕鏈的可變區(qū)連接而成，減少了免疫原性，分子小，實體組織穿透力強，血漿半衰期短，因而在臨床疾病的診斷和治療中具有重要的應用價值。 在成功建立穩(wěn)定分泌鼠抗人B7-2雜交瘤細胞株基

2、礎上，擴增并克隆出該單克隆抗體的重鏈（VH）和輕鏈（VL）可變區(qū)基因。通過重疊延伸PCR（SOE—PCR）方法，在VH和VL可變區(qū)基因之間引入連接肽（Gly4Ser）3，體外構(gòu)建抗人B7-2單鏈抗體（B7-2ScFv）基因。為便于表達產(chǎn)物的純化，在抗人B7-2 ScFv的C端增加了6×His tag序列。將其克隆至表達載體pET32a并在大腸桿菌中進行原核表達。SDS—PAGE和Western—blot分析結(jié)果表明，抗人B7-2 ScF