鼠抗人B7-2單克隆抗體的研制及應用研究.pdf

1、目的 建立穩(wěn)定分泌鼠抗人B7-2分子單克隆抗體的雜交瘤細胞株：研究抗體的生物學特性及功能；建立人可溶性B7-2分子的ELISA檢測方法。 方法 應用B細胞雜交瘤技術建立分泌抗人B7-2單抗的雜交瘤細胞株；快速定性試紙法鑒定單抗的亞類；體內(nèi)誘生腹水法制備單抗；免疫親和層析法純化抗體；間接免疫熒光法分析單抗對細胞膜型B7-2分子的識別：MTT法檢測單抗對Daudi的生長抑制和對PBTCs增殖的抑制作用；競爭抑制實驗分

2、析單抗識別的抗原位點。生物素標記抗體后建立可溶性B7-2分子的ELISA檢測方法。 結(jié)果 獲取一株穩(wěn)定分泌抗人B7-2分子單抗的雜交瘤，命名為6A5：快速定性試紙法鑒定6A5屬小鼠IgGl亞類及K型；經(jīng)體內(nèi)誘生腹水法制備單抗，小鼠腹水形成的陽性率約為80％，腹水的收獲量平均為5．9ml／只小鼠；經(jīng)免疫親和層析法純化，腹水中抗體蛋白的得率為1．1mg／ml：單抗6A5與L929-B7-2、PBTCs、Raji、MCF-7和

3、Daudi的陽性結(jié)合率分別為99．9％、4．6％、90．6％、79．6％和99．1％；將6A5(終濃度為5μg/ml)加入到Daudi細胞的培養(yǎng)體系中，經(jīng)顯微鏡觀察及MTT法分析，6A5對Daudi細胞的生長具有抑制作用。以絲裂霉素處理的L929-B7-2為刺激細胞，PBTCs為反應細胞，加入6A5共同培養(yǎng)：經(jīng)MTT法分析，6A5能阻斷B7-2介導的協(xié)同刺激信號，抑制PBTCs增殖：通過Biotin標記B7-2單抗，建立了人sB7-2分