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1、分類號(hào)S墨31:2UDC碩士學(xué)位論文抗新城疫病毒單鏈抗體(scFv)載體構(gòu)建及表達(dá)研究彭三鳳學(xué)科專業(yè)動(dòng)物遣佳直弛皇鏊殖指導(dǎo)教師莊直逸塾援睦阻渣硒宜員論文答辯日期2Q!三生且2Q目學(xué)位授予日期——答辯委員會(huì)主席五徨坦班宜旦抗新城疫病毒單鏈抗體(scFv)載體構(gòu)建及表達(dá)研究摘要新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的一類禽類呼吸道疾病,感染宿主高度致死,因此對(duì)中國(guó)乃至全球的家禽業(yè)造成巨大的威脅,至今仍無特異性治療藥物。單鏈抗體(scFv
2、)是免疫球蛋白最小的功能性結(jié)構(gòu)單元,具有抗原結(jié)合活性,且在脊椎動(dòng)物與非脊椎動(dòng)物中均能表達(dá)。單鏈抗體除了應(yīng)用于醫(yī)學(xué)診斷與治療,還具有中和病毒的能力。本研究探索利用PiggyBac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)構(gòu)建抗新城疫病毒單鏈抗體真核表達(dá)載體,分別為pB315B—CAG—puro—pGFP—scFv、pB315BEFla—puropGFP—scFv。通過脂質(zhì)體LipofectamineTM2000將構(gòu)建的兩個(gè)重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染DF1細(xì)胞和293T細(xì)胞,獲得了
3、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染抗新城疫病毒單鏈抗體的DF1一CAG—scFv、293TCAG—scFv、DF1EFla—scFv與293TEFlascFv等4種細(xì)胞系。PiggyBac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)在DF1和293T細(xì)胞中的轉(zhuǎn)座效率分別為191%和258%。RTPCR結(jié)果表明,抗新城疫病毒單鏈抗體基因在4種細(xì)胞中均檢測(cè)到mRNA。通過westernblot檢測(cè)與抗新城疫病毒單鏈抗體融合的His標(biāo)簽蛋白來確定其在各細(xì)胞系中的表達(dá)情況,結(jié)果表明,在上述4種轉(zhuǎn)染細(xì)胞的
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