抗新城疫病毒單鏈抗體(scFv)載體構(gòu)建及表達(dá)研究.pdf

1、分類號S墨31：2UDC碩士學(xué)位論文抗新城疫病毒單鏈抗體(scFv)載體構(gòu)建及表達(dá)研究彭三鳳學(xué)科專業(yè)動物遣佳直弛皇鏊殖指導(dǎo)教師莊直逸塾援睦阻渣硒宜員論文答辯日期2Q!三生且2Q目學(xué)位授予日期——答辯委員會主席五徨坦班宜旦抗新城疫病毒單鏈抗體(scFv)載體構(gòu)建及表達(dá)研究摘要新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的一類禽類呼吸道疾病，感染宿主高度致死，因此對中國乃至全球的家禽業(yè)造成巨大的威脅，至今仍無特異性治療藥物。單鏈抗體(scFv

2、)是免疫球蛋白最小的功能性結(jié)構(gòu)單元，具有抗原結(jié)合活性，且在脊椎動物與非脊椎動物中均能表達(dá)。單鏈抗體除了應(yīng)用于醫(yī)學(xué)診斷與治療，還具有中和病毒的能力。本研究探索利用PiggyBac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)構(gòu)建抗新城疫病毒單鏈抗體真核表達(dá)載體，分別為pB315B—CAG—puro—pGFP—scFv、pB315BEFla—puropGFP—scFv。通過脂質(zhì)體LipofectamineTM2000將構(gòu)建的兩個重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染DF1細(xì)胞和293T細(xì)胞，獲得了

3、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染抗新城疫病毒單鏈抗體的DF1一CAG—scFv、293TCAG—scFv、DF1EFla—scFv與293TEFlascFv等4種細(xì)胞系。PiggyBac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)在DF1和293T細(xì)胞中的轉(zhuǎn)座效率分別為191％和258％。RTPCR結(jié)果表明，抗新城疫病毒單鏈抗體基因在4種細(xì)胞中均檢測到mRNA。通過westernblot檢測與抗新城疫病毒單鏈抗體融合的His標(biāo)簽蛋白來確定其在各細(xì)胞系中的表達(dá)情況，結(jié)果表明，在上述4種轉(zhuǎn)染細(xì)胞的