香榧嫁接過(guò)程中ARF功能及轉(zhuǎn)錄組測(cè)序初步分析.pdf

1、香榧（Torreya grandis‘Merrillii’）為榧樹(shù)（Torreya grandis）中經(jīng)人工選育后嫁接繁殖栽培的優(yōu)良品種。香榧種子是中國(guó)特有的珍稀干果，是山區(qū)農(nóng)民的主要經(jīng)濟(jì)來(lái)源之一。目前香榧栽培存在幼苗生長(zhǎng)緩慢，造林成活率低等問(wèn)題。嫁接作為一種廣泛應(yīng)用的園藝手段，可以擴(kuò)大香榧的栽培規(guī)模，提高造林成活率。本文以香榧嫁接苗為試驗(yàn)材料，通過(guò)不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和遮蔭處理，研究不同處理、嫁接不同部位的內(nèi)源激素含量，克隆香榧的生長(zhǎng)素

2、響應(yīng)因子ARF，篩選嫁接相關(guān)的代謝通路，分析香榧嫁接過(guò)程中ARF基因家族的表達(dá)變化，為揭示ARF調(diào)控香榧嫁接的分子機(jī)制提供一定的理論參考。主要研究結(jié)果如下:
　　1、利用酶聯(lián)免疫法測(cè)定植物內(nèi)源激素含量的變化，測(cè)定指標(biāo)為IAA、GA、CTK、ABA四項(xiàng)，發(fā)現(xiàn)隨著嫁接時(shí)間的延長(zhǎng)，對(duì)照組中IAA和GA含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，ABA含量呈現(xiàn)先下降后上升趨勢(shì)而CTK含量則逐漸上升;外施IAA一定程度上誘導(dǎo)內(nèi)源CTK，GA和IAA含量表達(dá)

3、增加，而ABA含量減少;外施NPA則使四項(xiàng)激素含量都明顯下降，表明外施NPA對(duì)激素表達(dá)有抑制作用;遮蔭處理?xiàng)l件下，ABA和GA的含量有一定的提升，但CTK和IAA的含量總體有所下降。
　　2、克隆得到TgARF cDNA開(kāi)放閱讀框全長(zhǎng)為2676bp，預(yù)測(cè)編碼891個(gè)氨基酸，與15個(gè)植物的ARF基因比較，發(fā)現(xiàn)與挪威云杉的親緣關(guān)系最近，其次是黃杉。
　　3、利用qRT-PCR研究TgARF基因在不同處理下轉(zhuǎn)錄水平的變化，發(fā)現(xiàn)對(duì)照

4、組接穗中TgARF基因在嫁接后3天表達(dá)量下降，嫁接后7天上升并達(dá)到最大值，14天又下降;在砧木中則呈現(xiàn)穩(wěn)定上升趨勢(shì)，在嫁接后14天表達(dá)量達(dá)到最大值。激素和遮蔭處理對(duì)TgARF基因的表達(dá)也存在一定影響，遮蔭處理明顯加大了表達(dá)量的變化幅度。
　　4、基于轉(zhuǎn)錄組分析香榧嫁接過(guò)程中基因的表達(dá)變化，共得到17.8億個(gè)短片段，拼接得370391個(gè)獨(dú)立基因;對(duì)表達(dá)的差異基因進(jìn)行分析，分別在嫁接7天和14天的樣本中發(fā)現(xiàn)84468和135625個(gè)差