骨髓間充質(zhì)干細胞體外培養(yǎng)誘導分化為內(nèi)耳毛細胞前體細胞的研究.pdf

1、背景: 感音性神經(jīng)性耳聾在臨床上很常見,主要由衰老、噪聲、耳毒性藥物、外傷、感染、腫瘤、遺傳性疾病和免疫性疾病等疾病引起的耳蝸毛細胞損害所致.?？梢鹩谰眯缘穆犃ο陆?治療非常困難.隨著干細胞研究的深入,通過干細胞移植或再生補償毛細胞的損失,是迄今研究最活躍的領(lǐng)域之一. 骨髓問充質(zhì)干細胞(MSCs)是骨髓中除了造血干細胞以外的另一類成體干細胞,這類細胞具有高度自我更新和多向分化的潛能.在不同條件下MSCs可以定向誘導分化

2、為成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、肌腱細胞、心肌細胞、肝細胞、神經(jīng)細胞.MSCs來源廣泛,取材方便,不受醫(yī)學倫理學和法律的制約;且具有免疫源性弱的特點.探索MSCs誘導分化為內(nèi)耳毛細胞的可能性,試圖為干細胞移植治療感音神經(jīng)性耳聾提供實驗基礎(chǔ). 方法: 實驗用貼壁法提取大鼠MSCs,體外培養(yǎng)純化到第四代后,選取表皮生長因子(EGF)、堿性成纖維生長因子(bFGF)、胰島素樣生長因子-1(IGF-1)、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BD

3、NF)、神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT-3)、全反式維甲酸(ATRA)等因子,組合成不同的誘導條件,加入MSCs基礎(chǔ)培養(yǎng)液(2﹪FBS+1﹪N2+低糖DMEM液)中,誘導骨髓間充質(zhì)干細胞分化.在誘導過程中,動態(tài)觀察細胞形態(tài)變化,并用免疫細胞化學方法檢測毛細胞前體細胞或毛細胞特異性抗原myosinⅥ、pax-2、nestin、P27<'kipl>是否在誘導后的細胞表達. 結(jié)果: 1.EGF+IGF-1和EGF+IGF-1+BDNF+

4、ATRA誘導組,細胞形態(tài)呈短梭形樣、方形樣,未形成突觸.前組myosinⅥ表達弱陽性、pax-2表達中度陽性;后組myosinⅥ和pax-2表達均呈中度陽性.且nestin和P27<'kip1>也陽性表達. 2.加入NT-3、bFGF和BDNF的誘導組,細胞變圓或變細長,逐漸伸出突觸,部分細胞形成網(wǎng)絡(luò)狀、大環(huán)狀結(jié)構(gòu);有突觸的細胞,nestin表達中度陽性,而其他漸變的細胞表達弱或無;這種變化在加)kNT-3和bFGF的誘導組尤其

5、顯著. 4.同一誘導條件下,密集區(qū)細胞先變圓,以后如有空間逐漸伸出多個短突觸,否則仍維持圓形;不密集區(qū)細胞先變細長,以后兩端逐漸形成長突觸. 5.未誘導組骨髓間充質(zhì)細胞,nestin表達弱陽性;細胞呈梭形樣,邊界模糊,碎片增多. 結(jié)論: 1.骨髓間充干細胞可誘導分化為毛細胞前體細胞和神經(jīng)前體細胞. 2.EGF+IGF-1+BDNF+ATRA可作為較佳誘導組,使骨髓間充干細胞分化為毛細胞前體細胞.