內皮祖細胞在構建血管化組織工程骨中應用的實驗研究.pdf

1、目的：分離、培養(yǎng)和鑒定犬骨髓來源的血管內皮祖細胞(endothelial progenitorcells，EPCs)，并觀察其在實驗犬體內構建組織工程骨時對其血管化和成骨能力的影響。
　　 方法：抽取實驗犬骨髓，密度梯度離心法獲取單個核細胞，通過不同培養(yǎng)方法獲得EPCs和經(jīng)成骨誘導的骨髓間充質干細胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)，對EPCs進行觀察并采用乙?；兔芏戎鞍?Dil-ac-LDL

2、)、荊豆凝集素(FITC-UEA-I)熒光雙標、流式細胞儀鑒定；制備犬同種異體脫鈣骨基質(demineralized bone matrix，DBM)，于體外復合EPCs和經(jīng)成骨誘導的BMSCs，將復合體植入實驗犬背闊肌筋膜下，影像學和組織學方法觀察術后不同時間點組織工程骨的血管化和骨形成程度。所得數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件包進行配對t檢驗。
　　 結果：EPCs原代呈集落生長，培養(yǎng)至12天細胞出現(xiàn)“血管樣”生長并由長梭形變?yōu)?/p>

3、典型的“鋪路石”樣，Dil-ac-LDL、FITC-UEA-I熒光雙染色呈陽性、流式細胞術示細胞CD34和CD133呈陽性。動物實驗術后4、8、12周，X線顯示實驗側的骨密度值明顯高于對照側，兩組標本之間骨密度值之間差異有統(tǒng)計學差異(P<0.05)；組織學觀察顯示實驗側成骨和血管化均多于對照側，兩組新生骨面積及血管面積之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 結論：采用密度梯度離心與貼壁培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)的犬骨髓來源的單個核細