異丙酚單次劑量靜脈注射在犬腦的攝取和分布.pdf

1、腦是靜脈麻醉藥的效應(yīng)器官，了解靜脈麻醉藥腦內(nèi)藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué)規(guī)律對(duì)于指導(dǎo)臨床合理用藥有重要的意義，靜脈麻醉藥腦攝取研究即由此發(fā)展而來(lái)。異丙酚為臨床重要的靜脈麻醉藥，是當(dāng)前腦攝取研究的主要對(duì)象。 Upton等首先明確提出了腦攝取概念，論述了研究的基本設(shè)想-質(zhì)量平衡法則(mass balance principles)：即通過(guò)對(duì)腦循環(huán)動(dòng)、靜脈血中異丙酚濃度的測(cè)定和計(jì)算，間接反映異丙酚全腦攝取情況。目前的異丙酚腦攝取研究主要基于質(zhì)量平衡

2、法則，這些研究揭示了腦內(nèi)異丙酚藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué)的部分規(guī)律，指導(dǎo)了以效應(yīng)室為目標(biāo)的異丙酚TCI等臨床應(yīng)用。由于實(shí)驗(yàn)方法的限制和腦功能的特殊性，基于質(zhì)量平衡法則的異丙酚腦攝取研究不能反映腦組織對(duì)異丙酚的實(shí)際攝取和異丙酚腦分布情況，難以明確地反映異丙酚腦攝取隨時(shí)間變化的具體過(guò)程。為克服這些不足，必須改變現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)方法。 解剖異丙酚麻醉狀態(tài)下的動(dòng)物腦并直接測(cè)量腦組織中異丙酚濃度，此方法是對(duì)既往基于質(zhì)量平衡法則的腦攝取間接研究的改進(jìn)。此類研

3、究極少，目前僅由Shyr和Larsson分別以SD大鼠腦為實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行了初步探索。實(shí)驗(yàn)結(jié)果首次展示了腦中異丙酚的真實(shí)濃度及其分布情況。shyr實(shí)驗(yàn)中異丙酚在鼠腦內(nèi)分布均衡，而Larsson實(shí)驗(yàn)指出異丙酚在腦內(nèi)分布情況與注射速度和鼠齡有關(guān)。二者實(shí)驗(yàn)關(guān)于異丙酚腦分布的結(jié)論相異，異丙酚腦分布特征有待進(jìn)一步研究。鼠腦結(jié)構(gòu)和功能與人腦差別較大，難以對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行推廣，有必要對(duì)更高等的動(dòng)物加以研究。對(duì)異丙酚中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用的研究已經(jīng)取得了一些進(jìn)展，

4、但目前仍不能闡明其全麻作用機(jī)制。相當(dāng)多的研究表明中樞6ABA<,A>受體可能在異丙酚對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抑制中發(fā)揮重要作用。據(jù)此，人們提出了異丙酚全麻作用機(jī)制的中樞6ABA<,A>受體學(xué)說(shuō)，然而受當(dāng)前受體研究水平的限制，對(duì)此學(xué)說(shuō)的論證基本陷于停滯。異丙酚PET腦功能研究表明在異丙酚作用下不同腦區(qū)的葡萄糖代謝、區(qū)域腦血流變化有顯著的差異，說(shuō)明異丙酚不同腦區(qū)的作用不一致。由于技術(shù)手段尚不成熟，目前PET全麻機(jī)制研究的結(jié)論差異較大，所得出的腦功能

5、抑制區(qū)域分布與中樞GABA<,A>受體的分布規(guī)律有出入，不能對(duì)異丙酚GABA<,A>受體學(xué)說(shuō)提供有力佐證。因此有必要開拓新的異丙酚全麻作用機(jī)制研究思路，探索異丙酚腦攝取和腦分布特征對(duì)于其全麻作用機(jī)制研究可能有所助益。如果不同腦區(qū)對(duì)異丙酚的攝取不同，則可以對(duì)異丙酚在腦內(nèi)的作用差異現(xiàn)象作出部分解釋。如果某些腦組織對(duì)異丙酚的攝取顯著高于其它腦組織，則這些區(qū)域可能是異丙酚作用的主要部位，對(duì)其進(jìn)行深入研究可能有助于揭示異丙酚全麻作用機(jī)制。

6、 異丙酚在臨床中通常與鎮(zhèn)痛藥等麻醉藥物聯(lián)合應(yīng)用，尚無(wú)證據(jù)表明異丙酚腦攝取和腦分布是否受到這些藥物的影響，這一問(wèn)題對(duì)于指導(dǎo)異丙酚臨床應(yīng)用有意義。研究表明舒芬太尼能影響異丙酚TCI效應(yīng)室濃度及其清除、分布規(guī)律。舒芬太尼在腦內(nèi)分布不一致，PET研究表明舒芬太尼在腦內(nèi)作用有區(qū)域選擇性，其它研究也顯示舒芬太尼對(duì)腦代謝和腦血流有顯著的影響。異丙酚腦攝取受區(qū)域腦血流等腦功能狀況的影響，因此推測(cè)舒芬太尼對(duì)異丙酚腦攝取和腦分布有影響，目前還沒(méi)有研究涉及于

7、此。 本研究解剖異丙酚單次劑量靜脈注射全麻狀態(tài)下的犬腦，測(cè)量犬腦不同組織中異丙酚濃度，探索基于解剖、直接測(cè)量技術(shù)的異丙酚腦攝取研究的可行性，希望了解不同腦組織對(duì)異丙酚攝取的規(guī)律是否一致。同時(shí)根據(jù)異丙酚腦分布特征結(jié)合其它研究的成果探討異丙酚可能的全麻作用機(jī)制。選擇舒芬太尼為干擾藥物，觀察在小劑量舒芬太尼作用下犬腦不同組織中異丙酚的濃度變化，以對(duì)異丙酚腦攝取和腦分布受其它麻醉藥物影響的規(guī)律進(jìn)行初步探索。 為達(dá)到研究目的，本研

8、究改進(jìn)了異丙酚腦組織濃度和血漿濃度的測(cè)量方法，建立了HPLC-UV-沉淀法。材料和方法1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物準(zhǔn)備與分組： 12只周歲雄性健康犬，體重10-12kg。隨機(jī)分為兩組：A組(異丙酚組)和B組(異丙酚+舒芬太尼組)。實(shí)驗(yàn)時(shí)由右后肢大隱靜脈建立靜脈通路并保持通暢。 2 麻醉實(shí)施： A組：異丙酚7mg·kg<'-1>靜脈注射，注射時(shí)間為15s。預(yù)定麻醉狀態(tài)為眼瞼反射和踏板反射消失。 B組：舒芬太尼1μg·kg<

9、'-1>靜脈注射后，立即注入異丙酚7mg·kg<'-1>，注射時(shí)間為15s。預(yù)定麻醉狀態(tài)為眼瞼反射和踏板反射消失。 3 標(biāo)本采集： 達(dá)到預(yù)定麻醉狀態(tài)后解剖犬右側(cè)頸內(nèi)動(dòng)、靜脈，各取血2ml 快速注入抗凝管中，4℃冰箱中保存。斷頭法處死實(shí)驗(yàn)犬。無(wú)菌條件下去除顱蓋等組織，專人解剖獲取額葉、頂葉、顳葉、海馬、扣帶回、丘腦、中腦、橋腦和小腦組織，-17℃低溫冰箱中保存。 4 標(biāo)本處理： 血標(biāo)本在4℃低溫離心機(jī)中離心

10、30min(10000r·min<'-1>)。取血漿200μl置于EP管中，加入乙睛400μl，渦旋器震蕩2min后再離心10min(10000r·min<'-1>)，取上清液于EP管中保存。 腦組織樣品精確稱量后置于勻漿器中，加入乙睛(2ml·g<'-1>)充分勻漿，勻漿液離心4min(10000r·min<'-1>)后取上清液于EP管中保存。 5 異丙酚色譜分析： 采用HPLC-UV-沉淀法測(cè)量異丙酚濃度，外

11、標(biāo)物為異丙酚標(biāo)準(zhǔn)品。色譜柱為Dikma Diamonsil C<,18>柱(200mm×4.6mm，5μm)，柱溫4℃。流動(dòng)相A為乙酸胺(1mmol·L<'-1>)和乙酸(1g·L<'-1>)，流動(dòng)相B為甲醇，A：B為25：75。自動(dòng)進(jìn)樣量20μl，流速lml·min<'-1>，檢測(cè)波長(zhǎng)270nm。 6 數(shù)據(jù)分析： 采用SPSS10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。組內(nèi)頸內(nèi)動(dòng)脈和靜脈血漿異丙酚濃度比較采用

12、配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，組間異丙酚血漿濃度比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。組內(nèi)腦組織異丙酚濃度比較采用配伍組設(shè)計(jì)資料的方差分析，多重比較采用SNK法。A組和B組相應(yīng)腦組織異丙酚濃度比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。P<0,05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 1麻醉狀況： 所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均安全迅速地達(dá)到預(yù)定麻醉狀態(tài)并維持穩(wěn)定，無(wú)嘔吐、窒息、呼吸暫停等不良反應(yīng)。 2 異丙酚血漿濃度： A 組頸內(nèi)動(dòng)脈和頸內(nèi)靜脈血漿異丙酚濃度分別為11.

13、711±1.634、5.424±0.802μg·ml<'-1>，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(差值=6.287±0.878，t=17.545，P<0.001)。 B 組頸內(nèi)動(dòng)脈和頸內(nèi)靜脈血漿異丙酚濃度分別為11.100±1.585、5.444±0.780μg·ml<'-1>，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(差值=6.256±0.840，t=18.244，P<0.001)。A組和B組頸內(nèi)動(dòng)脈血漿異丙酚濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.012，P=0.9

14、91)，兩組頸內(nèi)靜脈血漿異丙酚濃度差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.044，P=0.996)。 3 異丙酚腦組織濃度： A組犬腦額葉、頂葉、顳葉、海馬、扣帶回、丘腦、中腦、橋腦、小腦異丙酚濃度分別為：8.102±1.238、8.076±1.316、8.296±1.853、5.596±0.747、8.344±1.871、10.977±2.998、8.555±1.464、8.488±1.353、7.931±1.104μg·g<'-

15、1>。各腦組織異丙酚濃度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=18.175，P<0.001)，丘腦異丙酚濃度高于其它腦組織(P<0.05)，海馬低于其它腦組織(P<0.05)。 B組犬腦額葉、頂葉、顳葉、海馬、扣帶回、丘腦、中腦、橋腦、小腦異丙酚濃度分別為：8.154±1.542、8.125±1.572、8.330±1.906、5.605±0.729、8.351±1.738、11.055±3.325、8.634±1.944、8.574±1.90

16、2、7.968±1.323μg·g<'-1>。各腦組織異丙酚濃度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=16.44l，P<0.001)，丘腦異丙酚濃度高于其它腦組織(P<0.05)，海馬低于其它腦組織(P<0.05)。 A組和B組間各個(gè)相應(yīng)腦組織異丙酚濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論 1．HPLC-UV-沉淀法可成功用于對(duì)腦組織和血漿中異丙酚濃度的測(cè)定。 2．異丙酚單次靜脈注射達(dá)到全麻狀態(tài)即刻，異丙酚犬腦攝取未