毛竹非組培轉(zhuǎn)基因及轉(zhuǎn)DhNiR基因水稻后代性狀分析.pdf

1、竹子傳統(tǒng)雜交與選擇育種困難，造成育種水平滯后，成為竹產(chǎn)業(yè)進(jìn)一步提升的限制因素。轉(zhuǎn)基因是有效育種手段，但是竹子再生比較困難，遺傳轉(zhuǎn)化成功的報(bào)道很少。本研究主要從兩方面入手，一方面通過(guò)非組培轉(zhuǎn)基因研究，避開(kāi)竹子組培再生的難題;另一方面是對(duì)能夠促進(jìn)植物再生的基因如DhNiR（Dendrocalamus hamiltonii，Dh）進(jìn)行研究，通過(guò)將促進(jìn)再生基因整合入雙元表達(dá)載體，以提高竹子再生與轉(zhuǎn)化效率。本試驗(yàn)的目的是分別將這兩種方法應(yīng)用到竹子

2、中，使竹子的轉(zhuǎn)化效率得到有效的提高。
　　本項(xiàng)目首先以毛竹種子為實(shí)驗(yàn)材料，用農(nóng)桿菌介導(dǎo)植物萌動(dòng)種子基因轉(zhuǎn)化方法將CP4-EPSPS基因成功轉(zhuǎn)化到毛竹種子中，成功獲得了轉(zhuǎn)基因植株。試驗(yàn)結(jié)果如下:在共培養(yǎng)時(shí)，菌液濃度以O(shè)D600=0.07為最適濃度，太低或過(guò)高的濃度都不利于苗的轉(zhuǎn)化和萌發(fā);且共培養(yǎng)液中加入400μmol·L-1乙酰丁香酮，可使出苗率提高8％左右;經(jīng)PCR分子驗(yàn)證獲得1株毛竹轉(zhuǎn)基因植株。
　　其次是對(duì)轉(zhuǎn)DhNiR基

3、因水稻進(jìn)行后代性狀分析，試驗(yàn)結(jié)果如下:以轉(zhuǎn)DhNiR的T2代水稻成熟種子和野生型水稻成熟種子為試驗(yàn)材料，經(jīng)愈傷組織誘導(dǎo)及增殖后，選取生長(zhǎng)良好的致密愈傷組織進(jìn)行分化培養(yǎng)，愈傷誘導(dǎo)率和苗分化時(shí)間上均表現(xiàn)出差異，轉(zhuǎn)DhNiR的水稻愈傷組織在轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基第25天時(shí)綠點(diǎn)愈傷率達(dá)到了100％，而野生型水稻綠點(diǎn)愈傷率僅為56.37％，且苗分化時(shí)間比野生型水稻早5天左右，表明DhNiR在水稻再生能力提高方面有促進(jìn)作用;以轉(zhuǎn)DhNiR基因的水稻和野生型